Precipitatul complexe imune. Domeniile de interacțiune ale lanțurilor de anticorpi

stat agregarea complexelor imune nu ar trebui să interfereze cu fixarea Fc-fragment al componentului complement, și în consecință difuzia acestora în precipitat. Investigarea structurii unui anticorpi specifici precipitat cu antigene a fost realizată prin intermediul etichetelor de spin (Grigoryan și colab., 1969). Pentru etichetarea proteinelor folosind radical nitroxil sintetizat pe baza maleimidă. Acesta reacționează covalent cu anticorpul SH-grupe iepure după reducerea cu legături disulfurice intercatenare 2-mercaptoetanol. Când sa păstrat această activitate de anticorpi.

Ca rezultat, precipitare anticorpi marcați cu spin label ovalbumină au continuat să se rotească liber, fără a se confrunta cu împiedicare sterică. Pe de altă parte, depunerea nespecifică a anticorpilor marcați cu spin cu sulfat de amoniu a dus la tag-uri de imobilizare puternice. Aceste date indică o grilă, structura afânat precipitatului format complexe imune.

In experimente folosind metodă Diferențele dicroism circular au fost găsite în spectrele de trei anticorpi antipnevmokokkovyh omoloage înainte și după interacțiunea lor cu liganzi specifici-geksasaharidny (Jaton e. a., 1975a). Am studiat modificările în spectrele recombinanților omoloage și H- hibride și L-lanțuri prin acțiunea unei haptene. Anticorpii recombinați omologe au spectru identic cu spectrul de anticorp nativ, în ciuda absenței intercatenare S-S legături.

Modificări în spectrele apar după legarea haptenei în toate cele trei anticorpi nativi, Fab-fragmente și molecule recombinante omoloage. Cu toate acestea, nu a existat nici o dovadă a modificărilor conformaționale asupra interacțiunii haptenei cu anticorpi recombinați getsrologichnymi. Aceste rezultate sunt confirmate prin variația randamentului cuantic fluorescenței anticorpilor. Ei indică specificitatea ridicată a interacțiunilor intercatenare în imunoglobuline.

informații unice o interacțiune domeniu în lanțurile pot fi obținute prin eticheta de spin. Aceste informații depinde de site-ul său de legare de proteine. Reziduul de aminoacid corespunzător (sau a reziduurilor) la care legarea are loc eticheta este determinată de condițiile structurii sale chimice și de etichetare (de exemplu, pH). În lucrarea noastră (Kaivarainen, Nezlin, 1967a), proteine ​​marcate cu doi radicali iminoxyl: 2,2,6,6-tetrametil-4-amino- (N-diclortriazină) - R și imidozolidom (2,2,5,5-tetrametil -1-oksilpirollin-4-carboxilic) - R2. În funcție de condițiile de aderare mărcilor care pot comunica cu lizină sau histidină.

Spectrul RES al etichetelor R, și R2 conjugat probabil să fie fanzine reziduurile de proteine ​​a constat din trei linii înguste caracteristice ale etichetelor slab immobizirovannoy fara a experimenta Steri-ically obstrucționat de macromolecula. In contrast, aceste spectre Spectrele RPE ale imunoglobulinei G, marcată cu R, (aderarea probabil resturi de histidină) constau din cinci componente.
astfel de Spectrele indică capacitatea etichetei să fie în două micromediul diferite - A și B, care diferă în microviscosity.

Similaritatea spectrele RPE IgG și diferite subunități sunt aparent cauzate comune tuturor acestor elemente structurale, și anume, domenii, și interacțiunea acestora. Această ipoteză este confirmată de faptul că proteoliza domenii izolate L-lanț A-componentă a spectrului ce corespunde unei etichete a imobilizat, dispar complet. Este important de remarcat faptul că în conformitate cu proprietăți fizico-chimice și metode imunochimice jumătate L catenele (domenii) își mențin structura spațială de bază inerente acestora în compoziția L-lanțuri intacte.

In experimentele pe Rt interacțiune marcată de spin- reziduuri de histidină asupra anticorpilor cu antigene izolate folosind anticorpi hemoglobinei anti-uman de iepure, IgG anti-bovine și LGG măgar anti-uman. Sub etichetele noastre de spin experimentale au fost asociate în principal cu Fab-fragmente. Modelul modificărilor spectrele RPE ale anticorpilor marcați cu spin prin reacția cu antigene care nu depinde de faptul dacă sau nu a format un precipitat.

În toate cazurile studiate, complexarea anticorpi marcați cu spin cu antigenele rezultat într-un raport de creștere a zonei de A-component în zona componentei relativ centrale a unui spectru de control al ESR. Mai mult, a existat o schimbare A-component tags creștere corespunzătoare de imobilizare în stare A. Deoarece aria Componentul este determinată de cantitatea de etichete în această stare, ei crescând mijloace crescând cantitatea de etichete în A stat sau creșterea duratei de viață a acestei stări.