MRNA este implicat în sinteza de anticorpi. Metodele de ARNm studiat

În prezent, două abordări - chimice si imunochimice. Prima se bazează fracționare chimică a ARNm izolat din celule producătoare de imunoglobuline. Principalele etape sunt: ​​selectarea celulei sau microzomale poliribozomilor mislomnyh legate de membrană (Stavnezer ea, e și Milstein 1971 1972 ....) - extracția ARN din ei în condiții care îi împiedică gradientului ARN densitate de fracționare degradatsiyu- saharozy- fracțiunile de selecție corespunzătoare dimensiunii purificarea ARNm intenționat de ARN ribozomal coloană cu oligo ((1T) - sau poli (U) -celuloză (sau sefaroza), baze numai întârzierea bogat adennlovymi ARNm (polyA mRPK), și studiul biologic activitate ip dedicat acțiuni.

În unele cazuri, o purificare suplimentară Preparate mRNA gel polnakrplamidnom electroforeza folosit în prezență de 99% formamidă (Farace e. a., 1976- Matthyssens s. a., 1976). Cu aceste sau alte variante ale schemei de mai sus, utilizate în prezent de către majoritatea covârșitoare a cercetătorilor. Randamentul individuale polyA ARNm tipic este de 0,01% din cantitatea de ARN introdusă (Brownlee e. A., 1973). Ca urmare, alocate în prezent plasmocitoame nz MOPC 70E, MOPC 21, MOPC 41 mai multe ARNm care codifică atât H și L-lanț. Puritatea majorității acestor medicamente nu depășește 40-60%.

Doar un singur grup autori recent a reușit astfel încât să se obțină ARNm cu o puritate mai mare de 90% (Matthyssens e. a., 1976). Acest lucru nu este surprinzător. Metoda utilizată se bazează, în primul rând, pe separarea moleculelor ARN în funcție de greutatea lor moleculară și, în al doilea rând, la departamentul de populație care conține udată ARN lipsit de ea.

În mod natural, celulele pot prezintă un număr de ARNm cu proprietăți similare, care nu sunt legate de imunoglobuline. Toate acestea se vor contamina în mod inevitabil, preparatele de ARN de ARN imunoglobuline individuale. Evident, ar fi fie mai mari sau mai mici, în funcție de proporția relativă a imunoglobulinelor sintetizată de celulele acestor impurități.

Prin urmare, pentru izolarea ARNm de mieloame, sinteza imunoglobulinei în care 30-40% din sinteza tuturor proteinelor, în general, această metodă poate fi ispolzovan- în același timp, pentru a izola ARNm care codifică sinteza imunoglobulinei din țesuturile limfoide normale, în special a compoziției celulare foarte eterogene pe splină este în mod clar nepotrivită.

mult mai mult perspectivă, Din punctul nostru de vedere, este o abordare imunochimice pentru rezolvarea acestei probleme. Avantajul său constă în faptul că deja prima etapă de fracționare implică selectarea strict specifice poliribozomilor individuale folosind anticorpi la proteina sintetizată de aceste poliribozomilor. Există trei variante ale acestei metode. Originea - depunerea poliribozomilor anticorpi la proteina sintetizată în prezența purtătorului, adică aceeași proteină (coprecipitare) .... (Delovitch și e, 1972- Laskov, Mitelman, 1975).

În al doilea rând - prelucrare poliribozomilor anticorpi la proteina sintetizată prin ele și precipitarea antiserului rezultat complex pentru anticorpi (precipitare indirectă) (Schechtcr, 1973, 1974a). Iar al treilea - care extrag poliribozomilor individuale prin intermediul immunosorbents conținând covalent sau non-covalent de anticorpi asociat sintetizate pe proteina poliribozomilor (Sidorov et al, 1973- Sidorova cu, Lubimova și colab modelul anului 1974, 1975 ....). Din astfel obținut poliribozomilor individuale sau a unui alt mod de ARN polizomal a fost extras și ARNm îndepărtat prin trecerea amestecului printr-o coloană cu un oligo- sau poli (U) -celuloză. Utilizând abordarea imunochimice a reușit să obțină preparate de ARNm de puritate de aproximativ 95%.