Metode pentru izolarea poliribozomilor. Dimensiuni poliribozomilor sintetiza anticorpi

În prezent, pentru a evidenția poliribozomilor din țesuturi și mielom tumori limfoide folosesc de obicei omogenizarea lor în soluții tampon Tris (pH 7,0-7,6) conținând zaharoză, KCl (sau mai puțin - NaCl), MgCl2 (sau acetat de magneziu) și oricare inhibitor RNaza (mai des - heparina). O condiție este utilizarea reactivilor care nu conțin RNazei. Mai întâi scos din nucleul omogenatul și mitocondriile supernatantul postmitochondrial a fost adăugat la oricare dintre detergent (deoxicolat de sodiu sau Triton X-100) a fost dizolvat enodoplazmaticheskogo membranei reticulului și precipitat polirobosomy (sau fracționate), într-o etapă (0,5-1,5 M) sau liniar (soluție de obicei 15-30%) gradienti de sucroză. Material Randamentul poliribosomnogo este în acest caz 30-50% din totalul ribozomi celulare.

Gradul de Nașterea Domnului poliribozomilor, obținute din diverse surse afectează concentrația de zaharoză, tăria ionică și pH-ul raportului soluție tampon este utilizat K / Mg și natura detergent. Astfel, pentru poliribozomilor din splină preferabil să se utilizeze Triton X-100, ca și în prezența deoxicolat de sodiu remarcat pentru degradarea lor. În unele cazuri, se recomandă, de asemenea, adăugarea de cantități mici de SaS12 sau spermidina îmbunătățind stabilitatea nucleii celulelor (Goryunova et al., Wall e modelul anului 1974. A., 1977) și 2-mercaptoetanol (Schechter, 1973). Pentru a reduce timpul de contact al poliribozomilor din lizat celular poate fi aplicat direct la celulele care conțin detergent inhibitor laminat direct pe gradient de sucroză. În acest caz, în timpul centrifugării kletkp lizată simultan și fracționate (Davis e. A., 1969).

Trebuie remarcat faptul că izolarea nativă poliribozomilor celule din țesuturile limfoide ale țesutului normal sau imunizat animal este mult mai complexă și proceduri mai puțin dezvoltate decât separarea lor de plasmocitoame. Poate că acest lucru se datorează faptului că există un inhibitor de RNaza endogen plasmacytoma, în timp ce în ganglionii limfatici splina și, nu este, și activitatea de RN-ază în imunizare chiar crește.

substanțial rol, se pare că joacă un fel de animal. Cele mai favorabile obiecte, rând de date sunt splina și ganglionii limfatici de șobolan, din care este posibil să se obțină poliribozomilor native, sedimentează la 250-350S și 160-190S conținând puls activ și o etichetă de aminoacizi (Vassalli, 1967- Vasil și colab., 1969). Există, de asemenea, rapoarte privind alocarea poliribozomilor native din splina de iepuri (Becker, Rich, Scharff 1966, Uhr, 1965) și cobai (Nikolaeva, 1976). Deoarece țesuturile tumorale cea mai bogata sursa poliribozomilor sunt limfoame mielomy- în număr mai mic din aceste organite (Sherr, Uhr, 1971a).

Ca rezultat, îmbunătățiri fracționare de tehnica țesuturi limfoide de animale Celulele și plasmocitoame murine au reușit să izoleze o largă varietate de poliribozomilor cu constantele de sedimentare de la 118S la 350S. Sa demonstrat că poliribozomilor cantitate de imunizare și jumătate până la două ori creșteri (Moav, Harris, 1970- YUrin, 1971), iar distribuția lor specifică devine natura bifazic. Date similare pe celule de mielom au fost obținute de Schubert (Schubert, 1968) și de contact (Sidorov și colab., 1973).

S-a sugerat că distribuția bifazic poliribozomilor, etichetate cu catene polipeptidice în creștere reflectă prezența a două clase de poliribozomilor implicate în sinteza H- și L-lanțuri. Experimente de imunoprecipitare cu poliribozomilor antiseruri H- și L-lanțuri a fost într-adevăr arătat că lanțul-H detectat numai pe poliribozomilor 270-300S, iar L-lant - preferabil pe poliribozomilor 180-190S (Shapiro ea, 1966a- Askonas, Williamson, 1967b ). Conform calculelor efectuate de autori, astfel poliribozomilor trebuie să conțină ARNm, care constă din aproximativ 1250 și 500 nucleotide, adică. E. Destul de potrivit pentru codificarea sinteza H- și L-lanțuri.

Datele obținute două concluzii importante în mod fundamental, și anume: 1) sinteza imunoglobulinelor este natura monotsistronnyi și 2) mărimea poliribozomilor și ARNm implicate în formarea H- și L-lanțuri, sunt suficiente pentru a codifica sinteza fiecăreia dintre ele ca un întreg.