Imunoglobulina reactivitate. Metoda de haptene marcate cu spin

HSIA și Little (HSIA, Little, 1973) a investigat interacțiunea două haptene marcate cu spin - derivat DNP hidrazonă N-1-oxil-2,2,5,5-tetrametil-3-pirolidinonă (I) și M-1- (oxil-2,2,5,5-tetrametil-3-metilamino) 2 4-dinitrobenzen (II) cu două mislomnymi IgA - MOPC 315 și 460 ca metoda EPR, și pentru a reduce randamentul cuantic al fluorescentei proteinei.

A constatat că prin legare haptene I și II MOPC proteină 315 N-O-grup în ambele cazuri, sunt imobilizate puternic condiție, dar sunt observate două tipuri de componente imobilizate în spectrul RES al compusului II în comparație cu domeniul de compuși I. Când legarea la proteina MOPC 460 libertatea de rotație compus grupa N-O, I, de asemenea, foarte limitată, în timp ce compusul grup de roto-N-O II legarea la această proteină are un efect redus.

Cu toate acestea, judecând după scădere strânsă a randamentului cuantic fluorescenței după legarea proteinei haptene și termodinamica studiul acestui proces marcate cu spin, afinitatea compușilor I și II proteinele MOPC 315 și 460 diferă ușor. Prin urmare, gradul de imobilizare grupa N-O-etichetat de spin hapten nu sunt în toate cazurile caracterizează rezistența complexului.

Potrivit autorilor, diferențele imobilizare Compușii I și II pot fi cauzate de două motive: 1) liganzi se leagă la diferite situsuri de situs activ conformațional rigid, 2) conformația sitului activ poate fi stabilizat în grade diferite, în funcție de diferențele în structura liganzilor.

În altă Am investigat cauzele, determinând apariția a două tipuri de componente imobilizată în spectrul RES al proteinei MOPC 315. complex II Sa demonstrat că aceasta se datorează două forme enantomernymi marcate spin hapten II. grupa N-O forma un ligand cu semnalizat micromediul mai puțin hidrofobe, iar al doilea - o mai hidrofob, rezultând într-o poziție diferită a componentei imobilizat pe axa intensității câmpului magnetic. Formele de legare a enantomernyh separate (marcate cu spin aminelor - DNP) proteina MOPC 315 (având ca rezultat apariția de un singur tip de componentă.

Metoda de haptene marcate cu spin

Schimbare de haptene marcate cu spin în situsurile active ale anticorpilor haptenă omoloage E au fost utilizate Leutom și membrii (Leute e. a., 1972) pentru a determina concentrația de morfină în soluția de testat. Această metodă utilizează efectul unei creșteri puternice a înălțimii liniilor RPE ale spectrului de morfină marcate spin în tranziția de la o stare imobilizat la liber, ca urmare a deplasării centrului activ. Înălțimea liniilor înguste disinhibited caracteristică a spectrului RES în acest caz concentrația de morfină în soluția de testat.

Limita inferioară de sensibilitate o astfel de 7M morfină metoda 10 (0,03 mg / ml). În plus, această abordare a fost dezvoltată (Montgomery e. A., 1975) și a fost utilizat pentru a determina concentrația unui număr de medicamente în ser. Sa dovedit a 100 (ori mai sensibile decât metoda chimică convențională și posedă o specificitate ridicată. Pentru o singură determinare destul de 50 de ser pl.

HSIA și co-lucrătorilor utilizate DNF complex - metilen (N-1-oxil-2,2,5,5, tetrametil-3-metil-aminopirolidină-2,4-dinitrobenzen) cu mielom IgA (MOPC 315) ca un sistem model pentru a studia reactivitatea încrucișată a proteinei în ceea ce privește DFT și analogii săi. La cantitatea de centre libere active deplasate de la haptena marcată de spin a fost judecat de intensitatea componentelor spectru vysokopolyyuy RES. Estimările cantitative obținute prin această metodă sunt în concordanță cu rezultatele dializei de echilibru. Metoda propusă este foarte promițătoare în studiile imunochimice.
următoarele concluzii privind structura situsul activ al anticorpilor se poate face pe baza datelor obținute.