Stabilizarea de imunoglobuline haptene. Dependența conformația anticorpului temperaturii

Există date de la diferite metode, arătând pentru a crește stabilitatea anticorpilor și lor Fab fragmentele rezultate din complexarea cu haptene. De exemplu, adăugarea acestora crește stabilitatea moleculelor haptenă la denatiruyuschemu acțiunea de clorhidrat de guanidină (Cathou, Werner, 1970) și la acțiunea chimotripsinei (Grossenberg e. A., 1965).

anticorpii IgM stabiliza, de asemenea, haptene specifice cu privire la proteoliză cu subtilizină și chimotripsina (Ashman, Metzger, 1971). Sa demonstrat că scăderea sensibilității la atacul proteazelor IgM complet datorită schimbării proprietăților Fab fragmente. Conform modelului nostru, se deplasează echilibrul haptena componenta A și B Fab-fragment din stânga.

Prin urmare, pentru a explica citată suficient pentru a permite rezultatele de mai sus că energia liberă este conformator mai compactă O limită inferioară liberă a energiei conformator B (t. e. A-conformator stabil decât B). Dacă da, atunci o creștere a stabilității proteinei nu ar trebui să depindă de modul în care trecerea de echilibru corespunzător cauzat.

Într-adevăr, s-a demonstrat că trecerea Un echilibru din stânga Dimerii marcate cu spin ale lanțurilor ușoare, simulând structura Fab subunități prin acțiunea de 1,2 M NaCI și 0,75 M (NH4) AS04 crește stabilitatea acestora în raport cu temperatura. O schimbare similară în echilibrul dintre conformeri A și B cauzează alte structuri perturbant a proteinei și agenții săi hidratare cochilie, cum ar fi dodecilsulfatul de sodiu și de temperatură.

dependență stare conformațională IgG temperatura detectată prin alte metode. De exemplu, G. Troitskii și asociații (1971) și J. F. Kiryuhin și colaboratorii (1972) prin dispersia rotatorie optice observate schimbări de temperatură de tranziție reversibile dependente de pH conformationale de la 27 ° la 38 °. Ulterior, sa demonstrat că în domeniul de pH neutru al temperaturii de tranziție nu depinde de punctul izoelectric al IgG.

Cu toate acestea, atunci când pH, la distanță de punctul izoelectric când molecula de IgG devine suficient de mare de încărcare proprie, temperatura de tranziție conformaționale sunt complet absente (Troitsky e. a., 1973). În VP Zavyalova și personalul (Zavyalov e. A., 1975) realizat cu multiple fațete mielom de cercetare de proteine ​​conformație ca o funcție de pH și de temperatură prin dispersie rotatorie optic, spectroscopie dicroismul circular perturbator, iodurarea electrochimice și calorimetrie de scanare diferențială.

S-a constatat că, atunci când pH-ul a fost schimbat 6.0-6.5 disponibilitate grupe cromofore scăderi cu solvent. Acest lucru se poate datora modificărilor numărului de grupări încărcate în proteine ​​și de a reduce forțele electrostatice intermoleculare de repulsie. Un fenomen similar - ecranare partea tirozină și resturile de triptofan (pH 7,35- tampon fosfat 0,01 M) -nablyudali cu creșterea temperaturii între 25 și 35 ° C. Aceasta apare la legarea anticorpului omolog iepure dinitrofenil haptena (IgG).

Aceste rezultate pot fi considerate ca o indicație a faptului că creșterea temperaturii și formarea complexelor specifice cu haptene crește compactitatea lor, ceea ce este în concordanță cu un număr de lucrări citate mai sus.