Diagnosticul de hormoni steroizi. metode

Video: Metode moderne de diagnostic și tratament al bolilor de ficat

Pentru a măsura cu precizie mici concentrațiile de hormoni steroizi și metoda de imunotest folosind imunoprecipitare inhibare competitivă sau radioimunologică (RIA) metaboliții lor, care a fost descris pentru prima dată de Berson și Yalow în 1960 .. Cu toate acestea, dezvoltarea în continuare a acestei tehnici oamenii de știință se confruntă cu unele dificultăți. În primul rând, steroizi, non-imunogen, și au o structură similară - nucleu ciclopentan-hapten cu variații ușoare, ceea ce face dificilă producerea de anticorpi specifici.

steroizi Se poate face imunogene, să li se alăture proteină purtătoare haptena și nivelurile de anticorpi pot creste haptene pre-imunizare. proteină Totuși porțiunea steroid, la care este conjugat are o influență semnificativă asupra specificitatea anticorpilor produși. Astfel, anticorpii generate în albumină serică bovină la poziția conjugare 19 prezintă o specificitate mai mare comparativ cu prevederile 3 sau 17. Pentru o interpretare mai precisă necesare clinice pentru a avea date privind reactivitatea încrucișată a fiecărui anticorp selectat pentru această analiză.
cele mai multe firme - producătorii de reactivi furnizează date privind reactivitatea lor încrucișată a anticorpilor, dar acestea nu sunt întotdeauna fiabile și ar trebui să fie verificate încrucișat că laboratorul, care va efectua analiza.

În al doilea rând, legarea de mare afinitate proteine, găsit în ser, cum ar fi SHBG, în competiție cu anticorpii, creând astfel zgomot pentru determinarea numărului de molecule de steroid prin RIA. Acest lucru conduce la dificultăți pentru măsurarea directă și necesită extracția prealabilă a steroidului cu solvenți organici și adesea separare cromatografică. În același timp, unele substanțe chimice, cum ar fi 8-anilinonaftalensulfonat, sunt capabile să inhibe proteine ​​de legare de steroizi, care permite măsurarea concentrației de steroid direct, fără extracție prealabilă.

Video: Metode moderne de diagnostic inofensive de picior și centru de ortopedicheskoym coloanei vertebrale „Julianna“

analiza directă Este nevoie de puțin timp și pot fi automatizate. În unitățile automate disponibile în comerț pentru determinarea concentrației de estradiol, progesteron și testosteron, care sunt folosite în multe laboratoare. Astfel de teste, cu toate acestea, sunt caracterizate printr-o sensibilitate scăzută, și pentru determinarea concentrației minime - fiabilitate scăzută. În acest sens, acestea nu sunt recomandate pentru a fi utilizate în determinarea concentrațiilor extrem de mici de hormoni, cum ar fi estradiol la copii și bărbați (<100 пг/мл), тестостерона у детей и женщин (<1,5 нг/мл) [64] и прогестерона во время стимуляции яичников (<1 нг/ мл).

problemă poate fi rezolvată prin extragerea hexan ser (raport volumetric 3: 2) urmată de uscarea și reducerea bessteroidnoy ser, care este apoi supusă analizei pe o unitate automată.

cerere cromatografie în fază gazoasă în combinație cu spectrometrie de masă (GC / MS) depășește multe dintre deficiențele immunoassay și este considerată metodă mai sigură și precisă. Cu toate acestea, GC / MS se realizează în mai multe etape, inclusiv extracția cu solvent, separarea cromatografică și interpretarea chimică care precede analiza instrumentală, iar sensibilitatea GC / MS este adesea mai mică decât cea a unor immunoassay specii. Recent, această tehnică este deplasată prin cromatografie lichidă cuplată cu spectrometrie de masă în tandem (LC / TMS), caracterizat printr-o sensibilitate mai mare și performanțe în comparație cu GC / MS.

Acum, această nouă tehnologie considerat un punct de referință. LC / TMS a fost utilizat pentru măsurarea simultană a nivelelor de estradiol și estronă în plasma sanguină umană fără crossreactivitate. Aceste tehnici pot fi recomandate ca o referință și utilizat pentru studiile de standardizare și de imunoanaliză de omologare care furnizează nevoile clinice necesare pentru simplitate și cu randament ridicat.