Diagnosticul indirect al bolilor genetice. Acuratețea diagnosticului molecular al posibilelor surse de eroare.

Indirect (indirect) abordare moleculara diagnosticare punct de vedere istoric, este mai devreme și mai universal. Aceasta se bazează pe o analiză a site-uri polimorfice intra- și vnegennyh. Deoarece acestea din urmă se extind în mod normal scurt ADN-secvență a acelorași regiuni omoloage de cromozomi care diferă în structura primară. Aceste site-uri polimorfe de diagnostic pot fi amplasate fie în interiorul genei în sine sau în imediata vecinătate.

O condiție indispensabilă pentru diagnosticarea ADN indirecte Este prezența în familia unui copil bolnav sau o oportunitate de a studia ADN-ul său (pete de sânge, preparate histologice etc.). Stabilirea conținutului informațiilor include identificarea sitului polimorfic, care poate fi utilizat ca un marker molecular pentru discriminare atât alelă mutantă și normal. În cazul bolilor recesive autozomale părinții vor fi heterozigotă pentru acest polimorfism, iar pacientul - homozigotă a unei alele a markerului. Acesta heterozigoției pentru polimorfisme moleculare definește conținutul informațional al unui anumit naștere de familie cu risc ridicat al unui copil cu o boală genetică. În funcție de distribuția de alele marker pe cromozomi omologi ai pacientului și a familiei sale părinții pot fi pe deplin informativ pentru ADN-ul diagnostic parțial informative sau uninformative.

Este esențial să se analizeze de familie cu risc ridicat este numărul de polimorf situri ale unei singure gene, pentru a determina exact la orice alela specifice mostenit gena mutantă, și de a face familia un complet informativ pentru PD viitor.

punct avantaj al metodei indirecte - posibilitate de diagnosticare ADN-ului, fără identificarea exactă a mutatii ale genei, chiar și în absența unor date exacte cu privire la identificarea și donarea genei mutante. dezavantaj semnificativ este incapacitatea de a diagnosticului în absența unui copil bolnav (nu se poate determina cu exactitate care alela legate de gene mutante polimorfă), o eroare în diagnosticul datorită posibilității de trecere peste în timpul meiozei și care transportă site-ul polimorfic pe alela sănătoasă.

Precizia de diagnostic molecular, posibile surse de eroare

În efectuarea diagnostic prenatal prin metode moleculare este important să se aibă în vedere cele două surse principale de eroare:
- celule materne fetale contaminare; proba
- posibilitatea de trecere peste atunci când se utilizează metoda indirectă.

Dată fiind foarte mare sensibilitatea metodei PCR, este important să se evite contaminarea probelor de țesuturi fetale ale celulei mamă. Puritatea probei de analiză poate bp realizată numai prin selectarea atentă a vilozități corionice placentar sau sub o lupă binoculară, urmată de spălare cu soluție salină. Este deosebit de important pentru a preveni contactul sângelui matern în cazul prelevării de probe de sânge din cordonul ombilical fetal de cordocenteza. Calificarea înaltă a medic-operator și utilizarea reacțiilor calitative pentru a identifica impuritățile din sânge materne evita această complicație. Riscul de astfel de erori de diagnostic pot bp semnificativ umenshen atunci când se lucrează în condiții sterile.

Fiabilitatea Molecular Diagnostics prin metoda directă, adică prin identificarea mutatii in gena este foarte mare și se apropie absolută. Cu toate acestea, având în vedere întreaga varietate de posibile modificări ale genomului în timpul maturării gameților (crossing-over), iar în fazele timpurii ale embriogenezei (efect mutagen) este indice de diagnostic mai precis de aproximativ 99,9%. Considerabil mai dificil de a evalua rezultatele moleculara diagnosticare metoda indirectă. În cazul înregistrării polimorfisme intragenic precizie de diagnostic indirect este destul de mare, deoarece cantitatea vnutritennogo crossover de obicei, nu mai mult de 0,1% pentru cele mai multe gene cunoscute.

O excepție poate fi doar gene relativ mari, cum ar fi gena distrofină, hemofilie A, neurofibromatoza, și altele. Astfel, în cazul ratei misdiagnosis distrofinei poate fi de până la 2%, ceea ce corespunde unui crossover de vnutritennogo de înaltă frecvență (aproximativ 2%) în această genă gigant (2,2 milioane bp). De asemenea, este important să se ia în considerare gradul de rude și probands pacientului care își petrece AP. Cantitatea de posibile creșteri de eroare în cazul în care alela markerul nu este determinată în fructe frate, în timp ce alte rude sale. Mai ales ar trebui să fie evaluate cu atenție rezultatele de diagnostic indirect, folosind vnegennyh locilor polimorfici. Se crede că cu încredere să-și petreacă AP, în aceste cazuri, poate fi doar testarea simultană a mai multor site-uri polimorfice care flanchează gena mutant. De obicei, utilizat pentru markeri de diagnostic molecular, frecvența de recombinare care alele mutante este mai mică decât zecimi sau sutimi de procente. ADN polimorfisme secvențe caracteristice de primeri pentru PCR, metodele indirecte de valori de eroare pentru diferite boli diagnosticate prenatally sunt rezumate în reviste și monografii.