Principalele abordări pentru diagnosticul prenatal al bolilor genetice. Diagnosticul direct al anomaliilor genetice.

Metode de diagnostic molecular - produs principal și instrument primar analiza structurii, și anume secvența de nucleotide într-o moleculă de ADN - baza genomului (aparat ereditar) persoana. Prima etapă a unui Grand International descifrare structura moleculara a programului de cercetare ADN uman a fost finalizat in 2000, crearea unui „proiect al genomului uman.“ În această secțiune ne limita la evidențierea principiilor de bază ale unei metode bazate pe ADN. Mai în detaliu cu tehnica de studii moleculare pot fi găsite în monografii speciale și manuale.

metodele de diagnostic bazate pe ADN, care vizează identificarea mutațiilor sau mutante moleculare de marcare cromozom este reacția în lanț a polimerazei sintezei de ADN (PCR). Metoda de vedere istoric anterior blot hibridizare Southern este utilizat în prezent mult mai puțin frecvent, deși sunt utilizate pentru identificarea anumitor mutații, în special mutații dinamice“, ceea ce duce la extinderea bolii (sindromul Fragile X, miotonicheskayadistrofiya, corea Huntington, o serie de boli neurodegenerative) și hemofilie a și anumite alte boli.

Metoda PCR a fost propusă în 1983 de savantul american Curry Mullis acordat pentru acest premiu Nobel descoperire in 1993, Metode de sinteză selectivă permite (amplificată) in vitro, segmente de ADN relativ mici și o lungime de la câteva zeci până la câteva kilobaze, folosind ca matriță ADN din orice conținând secvența amplificată.

necesar condiție pentru PCR este cunoașterea secvenței de nucleotide a regiunii de ADN amplificat, ca alegerea specifică a sitului este efectuată prin hibridizare a ADN matriță cu două primer sintetizat artificial - secvențe de oligonucleotide ADN, de obicei, de 15 la 30 pb complementară 3` terminații a porțiunii amplificate la sensul și toroane antisens ale ADN-ului, respectiv. Distanța dintre primeri determină lungimea moleculelor sintetizate. Detalii privind producțiile tehnica PCR pot fi găsite în manualele.

metoda PCR El a devenit un important in diagnosticul molecular al bolilor genetice. Dezvoltate și utilizate pe scară largă în practică, diferitele variante ale acestei metode pentru a identifica rapid si eficient mutatii, studiul polimorfismelor ADN utilizate pentru etichetarea moleculara a cromozomilor mutant.

În prezent, există două abordări de bază pentru diagnostic prenatal, precum și, în general, diagnosticarea bolilor genetice:
- diagnostic directă bazată pe identificarea imediată a mutatii ale unei gene specifice;
- indirect (indirecte) diagnostice, care se bazează pe etichetarea genei mutante (uneori numita marcare „pacient“ cromozom care poartă gena mutant) folosind markeri moleculari.

Diagnosticul direct de anomalii genetice

Prin diagnostic directă Identificarea mutatii ale genei. Avantajele metodei - ridicată (se apropie de 100%) acuratețea diagnosticului, posibilitatea PD si analiza informativa (adecvarea pentru diagnostic molecular) familiile și identificarea transportatorilor heterozigote în absența unui pacient copil.

la mutații genetice majore Aceasta necesită o analiză moleculară detaliată (scanare) structura primară a genei pentru detectarea mutațiilor care pot fi atribuite neajunsurile metodei.

Baza oricărei boli monogenice sunt încălcări ale funcțiilor genei, cauzate de mutații diferite în părțile sale semantice, și anume, o secvență de genă care codifică pentru sinteza proteinelor (ADNc). Spectrele de tip și mutație, cum ar fi expresia lor fenotipică (severitatea bolii) sunt specifice fiecărei gene și este determinată în mare măsură de caracteristicile unice ale structurii primare (secvență de nucleotide).

De asemenea, este cunoscut faptul că frecvența de diferite mutatii in fiecare gena este diferit. Sunt frecvente „majoră“ mutații, valoarea de diagnostic a ceea ce este deosebit de ridicat, iar „minor“ (un singur sporadice), înregistrând extrem de rare. Pentru multe dintre genele responsabile de boli ereditare, spectrele de mutație sunt bine studiat si dezvoltat algoritmi optime pentru identificarea acestora. De exemplu, un rezultat pozitiv pentru gena pentru fibroza chistica este delF508 mutatie, care se gaseste in aproape 50% din totalul cromozomi mutante CF la pacientii din Rusia pentru fenilalanina gena - aceasta R408W mutatie detectat Y45% dintre pacienții cu fenilcetonurie în Rusia, pentru gena distrofinei este caracterizată printr-un mod suficient de mari deleții, înregistrate în 60% din cromozomi X la pacienții cu distrofie musculară Duchenne, etc.

mai multe detalii Algoritmi pentru Molecular Diagnostics o varietate de boli monogenice sunt date în ghiduri speciale, comentarii.