Gena protrombinei anomalie 20210 g / a

In familiile de pacienti cu tromboza detectată autozomal dominanta moștenire F2: 20210 G / A.

În prezent, asociat cu această anomalie genetică cu supraproducție de protrombină. Cu toate acestea, în ciuda capacității tehnice de a determina niveluri crescute de protrombină, detectarea acestei boli ar trebui să se bazeze numai pe datele PCR a sensibilității și specificității PCR de înaltă furniza in vitro sintetizat oligonucleotide complementare la o porțiune corespunzătoare a genei protrombinei umane.

Principiul metodei

Pentru identificarea alelelor polimorfe în care amplificarea genei F2 utilizând porțiunile respective ale genei prin PCR cu detectarea ulterioară a produșilor de amplificare.

Reactivi și echipament

• Pentru a determina anomalii F2: 20210 G / A este utilizat următorul praymerypraymer 1 (primer) - 5`-TGGGAAATATGGCTTCTACA-3` (nucleotidele 20035-20054) - Primer 2 (primer invers) - 5`-CACTGGGAGCATTGAAGCT-3` (nucleotidele 20229- 20211).
• Probele de control cu ​​alela de tip sălbatic și de tip alele mutante.
• Thermocycle și alte echipamente pentru a efectua PCR.

Probele de sânge pentru studiu pentru materialul de cercetare poate fi orice sursă de ADN, dar mai mult sânge venos este folosit, care iau în eprubete ce conțin Probele EDTA au fost depozitate înainte de studiu, la o temperatură de 2 ... + 8 ° C timp de până la 24 h. Probele au fost depozitate lung pot fi congelate la -40 ..- 70 ° C

Izolarea ADN-ului din probe clinice de material poate fi realizată prin diverse metode, de exemplu prin utilizarea kit-uri pe bază de silice, seturi de un seturi de coloane microcentrifuga pe bază de extracție cu fenol-cloroform și altele.

tehnica de performanță

Metoda se bazează pe o regiune ADN copie sondare multiple folosind in enzima vitro. Progresul în studiu trebuie să îndeplinească echipamentele și procedura analizei PCR selectat (electroforeza în gel, flash-ul sau altele.).

Evaluarea rezultatelor studiului

Evaluarea rezultatelor se realizează într-un mod care să permită vizualizarea oligonucleotidic substituție polimorfic. Fragmentele de ADN au fost determinate folosind diferite vopsele fluorescente care se leagă în mod specific la ADN.

Interpretarea rezultatelor sondajului

Pentru mulți purtători ai polimorfismului caracteristic tromboza localizare diferita, un risc care crește substanțial în prezența sarcinii, utilizarea contraceptivelor orale, în perioada postoperatorie și altele. Gena penetranță incompletă, în acest sens, unii transportatori nu au antecedente de tulburări trombotice. În prezența acestei variante polimorfism vârstă homozigotă a primului episod este mai mică, iar frecvența și severitatea trombozei de mai sus. Detectarea heterozigota frecvență anomalie, conform literaturii de specialitate, este de aproximativ 1-2% din populație. În prezența F2: 20210 G / A nivelurile protrombinei la pacientii 1,5-2 ori mai mari decât în ​​mod normal.

Detectări anomalie protrombinei gena la pacientii cu tromboza fundamenteze recurente permite profilaxia anticoagulant prelungit. O astfel de cercetare este de a ajuta la identificarea femeilor gravide cu un risc crescut de tromboză.

Cauzele erorilor

• Erori de faza de pre-analitică a studiului (cu încălcarea condițiilor de depozitare sau de transport necorespunzătoare a acizilor nucleici biomaterial se pot descompune, cauzand fals heparina rezultate- negativ poate inhiba reacția PCR, astfel încât probele de sânge nu trebuie să fie efectuate în eprubete ce conțin anticoagulant).
• Contaminarea probelor un material biologic străin.
• Încălcarea principiilor de laborator zonare pentru studii genetice moleculare.
• Refuzul de a studia controlul negativ.
• Refuzul de a efectua re-analiza probelor pozitive.
• Eșecul de tehnici de izolare a ADN.
• Specificitatea și sensibilitatea primeri PCR depinde substanțial de structura, astfel încât utilizarea primerilor de la diferiți producători pot determina rezultate diferite.

Alte analitice Tehnologia PCR Diferitele exemple de realizare sunt considerate proceduri fiabile de laborator capabile să ofere o sensibilitate ridicată, specificitate și reproductibilitate. În ciuda existenței posibilităților tehnice de a identifica niveluri ridicate de protrombină, diagnosticul de trombofilie ar trebui să se bazeze exclusiv pe utilizarea variantelor PCR.