Factorul Leiden

Așa cum sa menționat mai sus, gena anomalie a factorului de coagulare V G 1691>A fost descoperit în 1994 de către R. Bertina și colab. O singură substituție de nucleotidă a guanină în adenină în poziția 1691 (1691 G>A) în exonul 10 gena F5 cauzeaza defect molecular al factorului de coagulare V. Deoarece înlocuirea la poziția 506 a argininei proaktselerina molecula la glutamină (Arg506Gln) perturbat capacitatea sa de colaps, rezultând în sistemul C anticoagulant Proteină disfunctia formarea si o tendinta de recidiva tromboza. anomalii genetice ale factorului de coagulare V (Leiden) este cel mai frecvent defect trombofilică la populația europeană.

Pentru detectarea materializări anomalii genetice folosind PCR. Sensibilitate ridicată și specificitate de PCR furniza in vitro sintetizat oligonucleotide complementare regiunea corespunzătoare a genei factorului de coagulare uman V.

Lipsa nomenclatorului defecte genetice cauzate pe scară largă în literatura științifică contemporană numeroase semne ale acestei anomalii: F5: 1691 G>A, Rs6025, Arg506Gln, G1691A, R506Q, Leiden (leydenovskaya) și altele.

Principiul metodei

Pentru identificarea alelelor polimorfe în care amplificarea genei F5 utilizând porțiunile respective ale genei prin PCR cu determinarea ulterioară a produșilor de amplificare.

Reactivi și echipament

• Probele de control cu ​​alela de tip sălbatic și de tip alele mutante.
• Pentru a determina anomalii F5 1691 G>S-au utilizat doi primeri. Primer 1 (Primerul): ACGTTGGATGC TGAAAGGTTACTTCAAGGAC, Primer 2 (primer invers): ACGTTGGATGCTCTGGGCTAATAGGACTAC.
• Thermocycle și alte echipamente pentru a efectua PCR.

Probele de sânge pentru studiu pentru materialul de cercetare poate fi orice sursă de ADN, dar este folosit mai mult sânge venos, care iau în tuburi conținând EDTA. Probele au fost depozitate înainte de studiu, la o temperatură de 2 ... + 8 ° C timp de până la 24 de ore. Probele depozitate lung poate fi numai în stare congelată la -40 ... 70 ° C,

Izolarea ADN-ului din probe clinice de material poate fi realizată prin diverse metode, de exemplu prin utilizarea kit-uri pe bază de silice, seturi de un seturi de coloane microcentrifuga pe bază de extracție cu fenol-cloroform și altele.

Metode de determinare a

Metoda se bazează pe o regiune ADN copie sondare multiple folosind in enzima vitro. Progresul în studiu trebuie să îndeplinească echipamentele și procedura analizei PCR selectat (electroforeza în gel, flash-ul sau altele.).

Video: Țările de Jos, Noord-Holland. Part1. 06-2011

Evaluarea rezultatelor studiului

Evaluarea rezultatelor se realizează într-un mod care să permită înlocuirea polimorfă oligonucleotidă de origine a lui. EXEMPLU vizualizarea rezultatelor de amplificare este prezentat în Fig. 5.1.

Video: toate orașele și țările lumii într-un singur loc

Materializări leydenovskoy rezultate de detectare anomalie a genei factorului de coagulare V următoarele: G / A - anomalii de formă heterozigoti la poziția 1691- A / A - anomalie homozigotă. Populația predomină genotipul G / G.

Interpretarea rezultatelor sondajului

Purtători leydenovskoy anomalii ale genei F5 sunt predispuse la tromboza, ceea ce crește semnificativ riscul în timpul sarcinii, utilizarea de contraceptive orale, în perioada postoperatorie, și altele. Gene penetranta este incomplet, prin urmare, un număr de transportatori nu are antecedente de tulburări trombotice. In aceasta varianta, prezenta frecventa mutatie homozigota si severitatea trombozei de mai sus. Detectarea heterozigota frecvență anomalie, conform literaturii de specialitate, este de aproximativ 1-3% din populație.

Substituția de aminoacid în poziția 506 dă locul de clivaj al moleculei de factor de coagulare V proteină C activată, ceea ce reduce semnificativ rata degradării sale. Prin urmare, prezența genei anomalii F5 G 1691>Un factor de coagulare rezistență observată Va de proteină C activată

Detectarea acestei mutații la pacienții cu tromboză recurentă permite să justifice profilaxia anticoagulant prelungite. Un astfel de studiu poate ajuta la identificarea persoanelor care au nevoie pentru a decide cu privire la utilizarea anticoagulantelor în punerea în aplicare a intervenției chirurgicale.

Video: Dr. Elena Berezovskaya - trombofilie si sarcina

Cauzele erorilor

• Erori de faza de pre-analitică a studiului (în încălcarea timpului de depozitare sau de transport necorespunzătoare a acizilor nucleici biomaterial se pot descompune, cauzand fals heparina rezultate- negativ este capabil de a inhiba PCR, deci probele de sânge nu trebuie să fie efectuate în tuburi conținând heparină).
• Contaminarea probelor un material biologic străin.
• Încălcarea principiilor de laborator zonare pentru studii genetice moleculare.
• Refuzul de a studia controlul negativ.
• Refuzul de a efectua re-analiza probelor pozitive.
• Eșecul de tehnici de izolare a ADN.
• Specificitatea și sensibilitatea primeri PCR depinde în mod esențial de structura, astfel încât utilizarea primerilor de la diferiți producători pot determina obținerea unor rezultate diferite.

Alte tehnici analitice

PCR variante dovedit a fi proceduri de laborator fiabile, capabile să ofere o sensibilitate ridicată, specificitate și reproductibilitate. In majoritatea cazurilor trombofilică pentru diagnosticarea unei stări asociate cu afectarea inactivarea proaktselerina poate fi utilizată prin metoda coagulării de determinare a rezistenței la proteină C activată Notă, totuși, că alte tulburări (hyperproduction Antihemophilic globulină, VA și colab.), De asemenea, posibilitatea de a induce rezistenta la coagulare factor V la proteina C activată