ADAMTS13

Astfel, în condiții normale de această protează scindează factorul von Willebrand multimerii și creează un normal și o greutate moleculară mică.

Deficitul de ADAMTS13 joacă un rol important în patogeneza purpură trombocitopenică trombotică (sindromul Moshkovitsa), deoarece eșecul acestei metaloproteinaze multimerilor mari de FvW sunt responsabile pentru formarea necontrolată a microagregate de trombocite, blocarea microcirculația. În ultimii ani, reducerea ADAMTS13 nu se găsește numai la sindroame de microangiopatie, dar, de asemenea, în glomerulonefrita cronică, sepsis, ciroză hepatică, DIC, și multe altele.

Principiul metodei

Principiul metodei (ELISA) pe baza legării de molecule de anticorp ADAMTS13 pe suprafața microplăcii specifice. După îndepărtarea substanțelor nelegat la microplaca, incubate cu anticorpul marcat cu enzimă (conjugat). Ca rezultat, pe suprafața microplaca se produce anticorpi aderare etichetează cu enzime complexe de gene anti-anticorpi existente. Adăugat după spălare 3,3`, 5,5`-tetra-metilbenzidin pentru a evalua activitatea enzimei amestec de test de colorare caracteristică. Intensitatea culorii este proporțională cu activitatea enzimei și, în consecință, numărul de ADAMTS13 în eșantion.

Video: TTP ADAMTS13

Reactivi și echipament

• godeurile microplăcilor acoperite cu anticorpi la ADAMTS13.
• tampon probă.
• Tamponul de spălare.
• O soluție de cromogen / substrat (cromogen - tetrametilbenzidină, substrat - peroxid de hidrogen).
• Oprește Solution.
• Echipament pentru efectuarea ELISA (mașină de spălat, cititor pentru tablete și altele.).

Distribuitor kit de diagnostic de reactivi - CJSC "BIOHIMMAK".

Probele de sânge pentru studiu ca probă pentru determinarea concentrației de ADAMTS13 BTP utilizarea stabilizata de sodiu citrat de sânge integral.

tehnica de performanță

Secvența acțiunilor unui medic de laborator la determinarea nivelurilor ADAMTS13 ar trebui să urmeze cu strictețe instrucțiunile de la un set de reactivi. Calibratoare recomandat să exploreze în definiții duplicat.

Video: ADAMTS13 Teil 1

Rezultatele evaluării studiului pentru a determina concentrația ADAMTS13 este necesară pentru a construi o curbă de calibrare. Pe curba de calibrare stabili valoarea absorbanței obținută prin măsurarea probelor de calibrare. Apoi, punctul interconectată se realizează o curbă de calibrare pentru determinarea concentrației de ADAMTS13 ( «point-to-point»). In mod normal, concentrația de ADAMTS13 este 50-140%.

Interpretarea rezultatelor ADAMTS13 ale studiului - un scindează metaloproteinazei factor von Willebrand. Concentrația scăzută și / sau o activitate ADAMTS13 redusă cauza idiopatică trombocitopenică trombotică purpură (sindromul Moshkovitsa). Sindromul Moshkovitsa caracterizate prin cinci mari manifestări clinice: tulburări neurologice, disfuncții renale, anemie hemolitică, trombocitopenie, febra. Boala este dificil, fără tratament pe baza patogenetica rata de mortalitate ajunge la 90%. Sindromul Moshkovitsa prezintă adesea o scădere a concentrației ADAMTS13 mai mică de 10%. Cu toate acestea mult mai utilă pentru diagnosticarea acestei patologii este determinarea activității ADAMTS13, ca în acest caz, cu excepția reducerii cantitativă a acestei inhibări poate fi detectat autoanticorpi metaloproteinază.

Mutațiile în gena care controlează sinteza ADAMTS13, capabil să determine recăderi frecvente trombocitopenică trombotică purpură. Manifestările clinice ale sindromului deficienței ADAMTS13 ereditară numită Upshaw-Schulman (Upshaw-Schulman). La acest nivel sindrom ADAMTS13 este mai mică de 6,7%.

La momentul de scris monografii, din păcate, nu sunt definite în mod clar caracteristicile de diferențiere purpură trombocitopenică trombotică și sindromul hemolitic uremic. Cu toate acestea, cei mai mulți experți tind să creadă că sindromul hemolitic-uremic nu se observă reducerea ADAMTS13, astfel încât această cifră este foarte importantă pentru diagnosticul diferențial al acestor condiții pun în pericol viața.

Cauzele erorilor

• Nerespectarea temperaturii Modul de depozitare a reactivilor.
• Proceduri de spălare Violarea (în cazul de spălare manuală trebuie spălate cel puțin 4 ori).
• Amestecarea reactivilor din loturi diferite.
• condensarea umezelii în interiorul sondelor (pentru a preveni apariția condensului nu trebuie deschisă până când pachetul până când se încălzește la temperatura camerei).

Alte tehnologii analitice plus de reactivi pentru măsurarea concentrație de ADAMTS13 există o metodă de determinare a activității metaloproteinazei. Lipsa activității cauzate de o mutatie sau prezența autoanticorpilor împotriva ADAMTS13.