Antigen FvW: Metoda determinare

Pe suprafața sondelor de plastic ale plăcii sorbită anticorpi față de factorul von Willebrand. În prima etapă a cercetării în puțul de microplaca probele sunt adăugate BTP. Moleculele vWF sunt fixate pe anticorpii respectivi și rămân legate atunci când se spală. În a doua etapă, în puțul de analiza a face anticorpi policlonali. La următoarea etapă de investigare într-un godeu de soluție de cromogen a fost adăugat. Această substanță este pictată după digestia enzimei. Intensitatea colorării depinde de conținutul factorului von Willebrand.

Metoda imunologica de determinare a factorului von Willebrand poate fi, de asemenea, pusă în aplicare folosind electroforeza rachete.

Coeficientul de variație ELISA pentru determinarea FvW: Ag este mai mică de 10%.

Video: Determinarea grupa sanguină și Rh factor

Reactivi și echipament

• Concentrat Tampon de spălare (pH 7,3).
• tampon de incubare (pH 7,3 PBS).
• standarde liofilizează.
• probe de control liofilizați de niveluri joase și înalte.
• Conjugatul de anticorpi policlonali.
• soluție de substrat.
• Soluția de stop.

Video: Blood (antigene de grup sanguin, Rh) [Este simplu]

Distribuitor kit de diagnostic de reactivi - CJSC "BIOHIMMAK".

Probele de sânge pentru cercetare

Pentru a efectua factorul de test Willebrand folosind PPP.

tehnica de performanță

Construcția de curbe de calibrare. În plus, este necesar să se construiască o curbă de calibrare folosind un sistem de coordonate liniar. Pentru a stabili curba de calibrare folosind valorii absorbanței obținute prin diluarea eșantionului cu o concentrație cunoscută de factor von Willebrand. Pe axa x este aplicată concentrațiilor de FvW: Ag în U / ml sau procente (1 U / ml = 100%), iar pe axa y indică absorbanta. În acele cazuri în care există eșantioane a căror valoare mai mare decât valoarea de cel mai înalt punct de calibrare a absorbanței, acestea trebuie diluat cu tampon de incubare (1 + 1) și retestate. Astfel, concentrația de măsurare rezultată trebuie înmulțite cu factorul de diluție.

Evaluarea rezultatelor studiului

Concentrația de FvW: Ag în oameni sănătoși variază foarte mult. Regulamentele depind de versiunea de un kit de diagnosticare, echipamente, sânge, reactivi, și mult mai mult, astfel încât nu există nici un interval normal, în general, acceptat la măsurarea acestui indicator. interval normal este de obicei specificată în instrucțiunile producătorului de reactivi pentru determinarea factorului von Willebrand, dar mulți producători recomandă ca fiecare laborator să stabilească propria gamă de valori normale. Este important să ne amintim că valorile medii ale nivelului acestei proteine ​​cu grupa de sânge I este de aproximativ 10% mai mică decât cea a altor pacienți care ar trebui să fie întotdeauna luate în considerare în diagnosticul bolii hemoragice.

Cauzele erorilor

• Absența sau ineficiența sistemului de control intern al calității. În prezent, sunt disponibile mostre de materiale de referință certificate de valori cu factorul von Willebrand. Având în vedere prezența unor abordări fundamental diferite metodologice pentru determinarea proteinei, trebuie să verificați cu atenție versiunea a studiului, pentru care a fost certificat proba de testare.
• doză incorectă de citrat la un gard de sânge venos. Lipsa de citrat de sodiu, din cauza hematocrit scăzute și hemoliza conduc la erori și rezultate nereproductibile.
• Hemoliza.
• Creșterea FvW observată în situații de stres în timpul antrenamentului, sarcina, sangerare, hipertensiune, boli infecțioase, terapia cu estrogeni. La femei, în diferite zile ale ciclului menstrual poate fi fluctuații în concentrația factorului von Willebrand. Pentru a standardiza influența hormonale asupra conținutului unei proteine ​​multimerice, unii experti recomanda pentru a diagnostica boala von Willebrand la femei între ziua a 5-a 7-a și a ciclului menstrual.

Alte tehnici analitice

Din păcate, nu există nici o singură procedură, care poate lua în considerare toate multe variante ale acestei proteine ​​anomalii, cu toate acestea pentru diagnosticarea vWD a dezvoltat un set de teste de laborator. Metode de cercetare de bază utilizate pentru a identifica deficiențe sau anomalie calitativă a factorului von Willebrand, bazate pe utilizarea tehnicilor imunoenzimatică. Mai mult, pentru diagnosticarea bolii studieze în mod eficient funcția de agregare a plachetelor normale tratate cu riisltOlCleıtilıı adaugarea PRP investigat. În scopul tulburărilor de diferențiere calitativă moleculă a acestei proteine ​​în continuare angajat și alte abordări metodice.

Determinarea activității riisltOlCleıtilıı cofactor a factorului von Willebrand

tratate formol trombocite pierde capacitatea de a efectua multe dintre funcțiile sale, r. H. Unitățile de formare și funcții ca răspuns la adăugarea mai cunoscute funcții inductori de agregare, dar cu adăugarea de riisltOlCleıtilıı într-un amestec de astfel de trombocite si studiul plasmatic au rapid aglutineze. In acest sistem de testare severitatea aglutinare este direct dependentă de prezența factorului von Willebrand, însă odată cu scăderea concentrației acestei proteine ​​sau inferioritate sale de calitate astfel de aglutinare slab exprimate sau total absente. Există două opțiuni prinitsipialno metodologie similară pentru determinarea activității riisltOlCleıtilıı cofactor a factorului von Willebrand. Origine - cantitativ, pentru punerea sa în aplicare necesită agregometru, al doilea - semicantitativă, implică o evaluare vizuală a timpului de apariție a aglutinează în diluții adaosului de plasma de testare, și ristocetin trombocite tratate cu formol. Ambele metode au un coeficient de variație mai mică de 10%.

Metodele de diagnosticare necesare pentru a diferenția diferitele versiuni ale bolii von Willebrand

Determinarea activității de legare a colagenului a factorului von Willebrand. Aderența plachetelor la fibrele de colagen subendoteliale realizate prin receptor plachetar GP-Ib / V / IX. Această interacțiune necesită FvW ca un cofactor, astfel încât la anomalii de proteine ​​multimerice sau a capacității sale insuficiente perturbat legarea la receptorii de colagen de trombocite. Pentru a determina activitatea de legare a colagenului necesită un set de reactivi și echipamente pentru a efectua testul ELISA. coeficientul său de variație să nu depășească 15%.

Determinarea factorului von Willebrand multimerice. Diagnosticul diferential modern de cele mai multe variante de tip 2 vWD se bazează, de asemenea, pe studiul factorului multimerice von Willebrand. Pentru a evalua capacitatea acestei proteine ​​pentru a forma multimeri din ce folosind electroforeza imună. Procedura de determinare multimerice destul de complicată, necesită echipament pentru electroforeza imunitar, adecvate pentru a efectua în laboratoare specializate efectuează în mod obișnuit electroforeză imunitar, kituri de diagnostic pentru punerea sa în aplicare nu este. Informații despre sensibilitatea și specificitatea acestei metode de diagnostic în literatura modernă nu este reprezentată, dar există rapoarte de versiuni necunoscute ale unei proteine ​​multimerice, pe care unii experți consideră ca artefacte de diagnostic.

Determinarea agregării plachetare cu riisltOlCleıtilıı (R1PA). Violarea agregării plachetare induse de riisltOlCleıtilıı este frecventă în laborator Willebrand manifestare a bolii. Acest exemplu de realizare pentru identificarea subtipului foarte specifice bolii 2B von Willebrand, în care există o agregare anormal de mare ca răspuns la adăugarea unor concentrații scăzute de riisltOlCleıtilıı. În alte anomalii, această metodă este doar de importanță secundară, deoarece este doza uzuală poate fi rupt pentru diferite exemple de realizare ale acestei patologii. Pentru a pune în aplicare această tehnică necesită agregometru și riisltOlCleıtilıı. Studii reproductibilitatea agregare cu riisltOlCleıtilıı depinde în mare măsură de modelul agregometru, experiența și instruirea personalului.

Video: pentru determinarea grupei sanguine prin foc încrucișat și factorul Rh