Criterii de calitate hormoni imunotestare

Oricare metodă ar trebui să fie specifice, sensibile, precise și să aibă o bună reproductibilitate. În plus, metoda de analiză ar trebui dezvoltat astfel încât a fost posibil să se măsoare nivelurile de hormoni în serul și sângele integral și plasmă, și uneori în urină și salivă (în cazul, de exemplu, steroizi). Un alt criteriu important - numărul minim și maxim ușurința de operare care urmează să fie efectuate de către personalul de laborator. Toate aceste criterii au fost proiectate pentru ultimul detaliu până la sfârșitul anului 1960. Pentru că vom face câteva observații și comentarii.

specificitate

Acesta este cel mai important indicator al calității oricărei metode imunotest. Specificitatea poate fi determinată ca capacitatea metodei de a detecta numai o mostră de substanță specifică (analit) și nu detectează nici o substanță străină, chiar foarte similare in structura cu ea. Cu alte cuvinte, specificitate - capacitatea metodei de a obține numărul minim de rezultate fals pozitive. Specificitatea testului imunologic este determinată în primul rând specificitatea anticorpilor primari. Ar trebui să fie deosebit de mare atunci când hormonii studii cu determinanți antigenici identice sau similare. De exemplu, adenogipofizarnye hormonilor FSH, LH, TSH și hCG sunt compuse din două lanțuri de polipeptide - obligeană, în care un lanț ele sunt identice. Dacă analiza oricăruia dintre acești hormoni, cum ar fi FSH, ca anticorpi primari utilizat nizkospetsifichnuyu antiser policlonal, majoritatea anticorpilor se leagă la o Catenele a tuturor celor patru hormoni, astfel încât rezultatul măsurătorii este fals pozitiv. Acest fenomen se numește reactivitate încrucișată. Reactivitatea încrucișată se observă prolactină când măsurarea, care face parte din aceeași familie cu hormon de creștere și lactogen placentar (toți acești hormoni sunt secvență de aminoacizi N-terminal foarte similar).

Specificitatea anticorpilor primari policlonali pot fi ridicate de imunoabsorbia antiseruri coloană cu antigene relevante. Această abordare a fost utilizată pe scară largă înainte de apariția tehnologiei hibridoma. In momentul de fata ca anticorp primar este folosit aproape întotdeauna anticorpi monoclonali specifici extrem care se leagă la determinanții antigenici unici la acest hormon.

Specificitatea unei analize imunochimice nu depinde numai de proprietățile anticorpului primar, dar, de asemenea, de mulți alți factori, uneori imprevizibile. În special, specificitatea poate fi redusă din cauza reacție încrucișată cu anticorpi primari, unele componente necunoscute într-o probă de ser sau plasmă. Sunt momente când unele dintre modificările de proteine ​​din zer conformație și acest lucru, deoarece el devine similaritate antigenică cu hormonul analizat. In final, componentele de ser pot fi introduse în situsurile active ale anticorpului primar și de a reduce specificitatea legării lor la antigen. Tehnologia imunoanaliză, există o serie de moduri de a preveni reacții încrucișate, cu toate acestea, imposibil de prevăzut toate surprizele.

Video: live sănătos! Tratament de infertilitate masculină

Majoritatea sistemelor de testare imunochimice concepute pentru a măsura nivelurile de hormoni in anumite fluide ale corpului uman (ser, plasmă, urină, salivă). Prin urmare, specificitatea sistemelor de testare stabilite pentru aceste fluide biologice. În cazul în care astfel de sisteme de testare utilizate pentru analiza in vitro a hormonilor, cum ar fi după incubarea celulelor endocrine în soluția tampon Krebs sau Ringers sau în orice mediu de cultură, este necesar să se verifice specificitatea lor în special în astfel de condiții „anormale“.

sensibilitate

Sensibilitatea testului imunochimice poate fi definită ca fiind concentrația minimă de substanță care poate fi măsurată prin această metodă. Pentru a evalua sensibilitatea utilizând un eșantion standard cu o concentrație cunoscută a unui hormon sau alt antigen. Această probă a fost preparată prin diluții în serie ale probelor cu scăderea concentrației plasmatice a hormonilor. Astfel, sensibilitatea sistemului de testare este direct proporțională cu gradul de diluție a probei etalon, cu care este posibil să se obțină un rezultat precis de măsurare. Sensibilitatea sistemului de testare imunochimice depinde în principal de afinitatea anticorpilor primari, care sunt utilizate în ea. In plus, sensibilitatea depinde de tipul de teste imunologice, pe care sistemul de testare este proiectat. În general, sistemele de testare sensibile bazate pe RIA este mai mare decât analiza immunohemilyuminestsentnogo sistemelor de testare bazate și ELISA.

Video: Ce mancare? 5 criterii. alimente crude, fruktoedenie

Pentru a evalua sensibilitatea utilizând un eșantion standard cu o concentrație cunoscută a unui hormon sau alt antigen. Această probă a fost preparată prin diluții în serie ale probelor cu scăderea concentrației plasmatice a hormonilor. Astfel, sensibilitatea sistemului de testare este direct proporțională cu gradul de diluție a probei etalon, cu care este posibil să se obțină un rezultat precis de măsurare.

Sensibilitatea sistemului de testare imunochimice ar trebui să fie de așa natură încât să poată fi utilizat pentru a măsura nivelurile de hormon a fost localizat nu numai în gama normală de concentrații, dar, de asemenea, sub acest interval. Prin urmare, sistemele de testare designeri se străduiesc să atingă sensibilitatea între 3 și 5-a percentila sau standarde în intervalul între două și trei abateri standard de la limita inferioară a valorilor normale. De exemplu, intervalul de concentrații normale de LH la femei este 1,1-77 UI / L (2,3 162 pmol / L). Prin urmare, sensibilitatea sistemului de testare pentru măsurarea LH ar trebui să fie de aproximativ 0,4 UI / L (0,84 pmol / l). Această sensibilitate ridicată este deosebit de important atunci când este necesar să se măsoare concentrații scăzute de LH, în special pentru diagnosticul diferențial al amenoreei primare. În această situație, nivelurile de LH sub 10 UI / L indică (hipogonadotrofic) hipogonadism secundar, în timp ce niveluri mai ridicate - cu hipogonadism primar. sistem de testare imunochimică trebuie să aibă o sensibilitate ridicată și în acele cazuri în care doriți să prindă chiar și cea mai mică schimbare a concentrației hormonului. Cel mai adesea, această problemă apare în planificarea și evaluarea eficienței terapiei de substituție hormonală. De exemplu, în tratamentul dozei de hipotiroidism levotiroxină selectat măsurători TSH. În mod normal, nivelul TTG variază între 0,4 și 4 mUI / L (2,9-29 pmol / l). în timp ce sistemele moderne de testare pentru măsurarea TSH au o sensibilitate mai mici de 0,01 mU / L (0,073 pmol / l). măsurători ale TSH extrem de sensibile repetate permit ajustarea endocrinolog foarte precis doza de levotiroxină.

Sensibilitatea sistemului de testare este în primul rând depinde de afinitatea anticorpilor primari, care sunt utilizate în ea. In plus, sensibilitatea depinde de tipul de teste imunologice, pe care este dezvoltat sistemul de testare (analiza immunohemilyuminestsentny RIA, ELISA). Sensibilitatea RIA și immunohemilyuminestsentnogo analiză, în general, mai mare decât sensibilitatea ELISA, la fel ca în primele două metode de reacții imunochimice au loc în faza lichidă, în care determinanții antigenici ai hormonilor au devenit mai accesibile pentru anticorpi primari. Cu toate acestea, în scopuri de cercetare și sunt realizate sistem de testare extrem de sensibil bazat pe ELISA.

precizie

Acest grad de apropiere a rezultatului măsurarea concentrației hormonului la adevarata sa valoare. Precizia depinde de sensibilitatea și eroarea sistematică în metoda: cu cât sensibilitatea și cea mai mică eroare, cu atât mai mare precizie. Precizia sistemelor de testare imunochimice a fost evaluată prin măsurarea concentrației hormonilor în probe standard.

reproductibilitate

Această metodă de testare capacitatea imunochimică rezultate similare posibile cu măsurători repetate concentrației hormonului în aceeași probă în diferite condiții (la momente diferite, în diferite laboratoare). Pentru a evalua reproductibilitate a fost folosit ca probe standard obținute de la pacienți și mostre. Pentru a realiza o reproductibilitate ridicată, laborator trebuie să fie fluent în lucrul cu această metodă sistemul de testare și măsurătorile în condiții standard (la aceeași temperatură, aceleași durate ale reacțiilor).

Video: Awareness Technology - Lucrul cu un analizor automat biochimic ChemWell-T

Specificitatea, sensibilitatea și reproductibilitatea este obligatorie sunt specificate în instrucțiunile și fișele de date pentru toate sistemele de testare imunochimice disponibile în comerț și autoanalizator imunochimice. Cu toate acestea, fiecare laborator ar trebui să evalueze în mod independent, toate aceste setări, în special reproductibilitatea, în condiții reale de funcționare.