Activitatea fagocitară a celulelor dendritice. Immunophenotype celulelor dendritice

celulele dendritice, derivate din celule de măduvă osoasă de la șoareci au fost testați pentru capacitatea de a fagocitozei. Activitatea fagocitară a DC în diferite stadii de diferențiere, activate Immunovac-PE-4, precum și un inductor clasic al ACO maturării TNF-a, a fost evaluat pentru absorbanta împotriva tulpinilor de S. aureus și S. typhimurium. Ca martor, au fost folosite macrofage care au fost preparate din aceleași celule de măduvă osoasă prin cultivarea lor cu GM-CSF timp de 7 zile.
Celulele dendritice imaturi bacterii fagocitozate mai activ, spre deosebire de celulele dendritice tratate Immunovac-VP-4, ACO și TNF-a.

Activitatea fagocitare a macrofagelor și a celulelor dendritice a fost studiat în dinamică împotriva S. aureus și S. typhimurium.
Cele mai active au fost macrofage, indexul fagocitară acestora față de S. aureus, după 30 min de incubare a fost de 86,0 ± 4,8%, și a rămas la un nivel înalt de observație de trei ore.

activitatea fagocitară DC imature stimulate și imunomodulatoare de origine microbiană au fost semnificativ diferite.
Adăugată la miercuri cultivarea TNF-a sau Immunovac-VI-4 (grupele 2 și 3), activitatea fagocitară a fost semnificativ mai mic, cu adăugarea de Immunovac-VP-4 indice fagocitar a fost ușor mai mare decât în ​​cazul sub influența maturarea DC TNF-a. Sub influența SOA a arătat, de asemenea, o scădere a DCs fagocitoză, dar nivelul acesteia a fost mai mare decât Immunovac-VP-4, care poate indica prezenta în cultura DCs imature și macrofage. Atunci când se compară gradul de fagocitoză a S. aureus și S. TY-phimurium diferente semnificative s-au găsit.

bine probabil, că activitatea mai mare a celulelor dendritice stimulate de absorbție bacterii Immunovac-VP-4 și expresia receptorilor ACO datorate Toll-like de pe DCs și macrofage care au afinitate pentru structurile asociate patogen de bacterii. După reacția cu produse bacteriene, DC transferate într-o nouă stare funcțională, reflectată în reducerea activității fagocitare și capacitatea de prezentare a antigenului mai puternic comparativ cu macrofage.

studiu Caracteristicile immunophenotypic ale celulelor dendritice în diferite stadii de maturare au fost realizate utilizând flyuorestseinizotiotsianat și PE-etichetat anticorpi monoclonali companie, USA «Caltag».

Gradul de diferențiere și Celulele dendritice mature, derivate din celule de ficat de șoarece embrionare a fost determinată de modificarea nivelului de expresie a moleculelor de diferențiere CD34, CD38, CD40, CD80, CD86, CD83, F4 / 80, MHC I, II MHC după 3 zile după adăugarea la celule dendritice imature Immunovac-VP-4, lizat bacterian K. pneumoniae sau TNF-a.

constatări spectacol că TNF-a și Immunovac-VP-4 în concentrațiile studiate maturarea DC stimulate. Cu toate acestea, judecând după expresia markerilor de diferențiere, TNF-a maturizării DC activat într-o măsură mai mare decât Immunovac-VP-4 și lizatul K. pneumoniae. Concentrația de 25 ug / ml Immunovac-PE-4 a fost optim pentru inducerea DK- maturare în aceste condiții, nivelul de expresie a moleculelor costimulatoare a fost mai mare. Cu toate acestea, expresia F4 / 80 molecule de pe DCs stimulate Immunovac-VP-4 și lizat K. pneumoniae, a rămas ridicată (23,8 ± 2,6% și 21,2 ± 3,4%, respectiv), comparativ cu DC, tratate cu TNF-a (0,6 ± 0,2%).

A fost de asemenea investigat immunophenotype celulelor dendritice, derivate din celule de măduvă osoasă de la șoareci. Ca inductori maturație utilizate imunomodulatori de origine bacteriană - Immunovac-VP-4 GMDP, ASO și ca martor - LPS lizat și K. pneumoniae și TNF-a.

Activarea celulelor via Immunovac-VI-4 GMDP și conduce la maturarea celulelor. Crește expresia moleculelor costimulatoare, CD38 molecula de adeziune. Astfel, concentrațiile utilizate Immunovac-PE-4 au avut efecte diferite asupra nivelului de MHC. La o doză de 25 ug / ml de MHC I I a fost de 2,7 ori mai mare decât la o concentrație de 50 ug / ml. Expresia MHC II a fost ridicată la ambele doze și nu au avut diferente semnificative. GMDP conținut mărit de curent continuu care exprimă MHC clasa II.

utilizarea lizat K. pneumoniae și LPS îmbunătățit nivelurile de expresie ale moleculelor costimulatoare molecule MHC I prezintă antigenice și II.

Când utilizați ACO ca un inductor al DC expresiei marker de maturizare CD34 a suferit modificări semnificative în funcție de doză. Dinamica sa observat doar la dozele cele mai mari. În aplicarea ARF într-o doză de 0,3 EU / ml CD80 conținut crescut, CD86, MHC I celulele care exprimă. Cu toate acestea, nivelul de CD86 a fost mai mică decât cu alți inductori de maturare. Exprimarea markerul F4 / 80 DC stimulate Immunovac-VI-4 pot fi asociate cu prezența LPS bacteriene într-un vaccin. Aceste rezultate sunt confirmate prin capacitatea DCs obținute anterior tratate cu LPS, antigene expres nu numai maturi DC, dar, de asemenea, receptori pentru LPS.

următoarele experimente Am studiat expresia acestor markeri în combinație immmunomodulyatorov origine microbiană (IMMP) cu TNF-a. Cultivarea DC în prezența GM-CSF și IL-4, cu adăugarea în a șasea zi de 2,5 ng / ml TNF-a și maturarea IMMP DC stimulate într-o măsură mai mare decât doza de TNF-a, și de întreținere reduse în cultură a macrofagelor. Prin sine, TNF-a la o concentrație de 2,5 ng / ml (grupul 3) nu a indus maturarea DC în comparație cu controlul (grupa 2), CD34 marker de imatur a fost de 5 ori mai mare, F4 / 80 - 11,4 ori, este ceea ce sugerează că există un interes semnificativ în cultura de macrofage. Cu toate acestea, atunci când koinkubatsii 2,5 ng / ml TNF-a expresie a avut loc cu imunomodulatori crește molecula de adeziune CD38, molecule costimulatoare CD40, CD80, CD86 și MHC I și clasa II.

în special acest lucru se aplică ASO, koinkubatsiya deoarece cu TNF-o expresie stimulată de markeri specifici de suprafață la DC. Acest lucru reduce marker CD34 în comparație cu DC imature (grupa 1), de 3,4 ori, expresie crescută a moleculelor de adeziune CD38 de 3,2 ori, molecule costimulatoare CD40 de 38 de ori, CD80 și CD86 aproape 9 ori, MHC I 2 7 și MHC II de 1,5 ori, nivelul markerului macrofagelor a scăzut cu 3,6 ori. La intrarea în cultură, mediu de TNF-a și Immunovac-VI-4 este găsit și un efect de stimulare, care exprimă faptul că a crescut semnificativ expresia MHC I și II și un conținut scăzut de F4 / 80, în comparație cu acțiunea Immunovac-VI-4 în aceeași doză (Tabel. 7). Rezultate similare au fost obținute cu o combinație de TNF-a (2,5 ng / ml) și GMDP, dar expresia CD40, CD80, CD86 și MHC II a fost mai mare în cazul unei combinații de TNF-a și Immunovac-VP-4.
constatări spectacol, că introducerea în mediul de cultură o cantitate mică de TNF-a crește potențialul maturarea DC sub influența imunomodulatori de origine microbiană.