Dezvoltarea și utilizarea metodelor pentru determinarea serotipului genotipuri ale virusului hepatitei C.

Virusul hepatitei C (TOS) se referă la vozbuditelyams heterogenitatea extrem pronunțată a populației. Sa constatat că pacienții cu HS cronică asociată cu diverse genotipamivirusa, raspund diferit la virusul interferonoterapiyu.Opredeleniegenotipov HS important în studiile epidemiologice, deoarece permite transferul unui agent patogen bine documentat.

Scopul acestui studiu - pentru a evalua vozmozhnostimetoda serotiparea pentru a determina genotipurilor HS. Dlyaserotipirovaniya a fost adoptat de metoda originala, opisannyygruppoy cercetatori din Marea Britanie sub P.Simmonds de orientare (1993,1995). 12 peptide scurte (18-19 aminoacizi) care reprezintă epitopi ai proteinei NS4 6 genotipuri agricole au fost sinteza poluchenymetodom în fază solidă, de purificare prin cromatografie și vysokoeffektivnoyzhidkostnoy utilizate ca bază immunosorbentadlya imunotest cu seruri soderzhaschimiantitela la proteina NS4 (anti-NS4) . Prezența anticorpilor anti-NS4 podtverzhdalosv ELISA cu un amestec de peptide pentru serotiparea sau prin immunoblotting (LiaTek HCV, Organon Teknika- Wellcozyme HCV Western Blot, Murex).

Specificitatea genotipuri determină razarabotannymvariantom grele serotiparea studiate prin compararea rezultatelor panoului „orb“ test de 154 seruri anti-NS4-pozitivnyhobraztsov cu genotipuri cunoscute (cu excepția 1 probă) definită utilizând procedura descrisă RFLP P.Pohjanpeltoet al. (1996) la Departamentul de Virusologie, Universitatea din Helsinki.

Pentru studiul propagării variantovvirusa GS în unele zone din Rusia (Sankt-Petersburg, Nijni Novgorod, Ufa, Belgorod) și țările vecine (Belarus, Kazahstan, Georgia) cu serotipul au fost testate anti-NS4-pozitivnyesyvorotki primite de la 474 de persoane, inclusiv 157 de donatori de sânge , 237 pacienți cu hepatită C, și 80 de persoane cu risc (vnutrivennyenarkomany, pacienții cu cancer, pacienții hronicheskogogemodializa centre, spitale si alte tuberculoza.).

Rezultatele „oarbe“ testare 154 syvorotoks genotipuri ale virusului hepatitei C cunoscute de RFLP prezentate tabel №1. In general, serotipirovano 148 probe (96,1%). Polnoesovpadenie sulf- și genotipurilor observate la 130 din 148 seruri (87,8%). Pentru genotipuri individuale această cifră a fost razlichnym.Naibolshaya rezultate care se potrivesc frecvenței observate pentru HCV-1 - (92,5%), cu un indice de dispersie de 87,1% pentru subtipa1v seruri la 100% pentru seruri cu subtipuri mixte 1a + 1v- pentru VHC 3- 94,3% (toate pacientele tratate ser subtip 3a). Cea mai mica rezultate protsentsovpadeniya observate la testarea pe seruri RFLP aparținând HCV-genotip 2 (80%). Când 5 serotipirovaniibylo detectat seruri care ar putea fi atribuite genotipuHCV-4. Cu toate acestea, atunci când se compară rezultatele cu sovpadenieotmecheno date RFLP doar 2 probe (40%).

Rezultatele de detecție ridicat de corelare genotipovvirusa GS a primit două metode complet diferite pentru studierea pozvolilaispolzovat serotip circulant GS variantovvirusa în teritorii separate. Rezultatele acestei părți issledovaniysummirovany în tabelul №2. In general, toate studiat territoriyahvyyavlena circulație 3 genotipuri HS în singur sluchayahv patru regiuni definite HCV-4 genotip. Cel mai adesea opredelyalsyagenotip HCV-1 (de la 47,1% în seruri din Georgia până la 74,4% - din Belarus) locul .Vtoroe clasament privind rata de detectie a tuturor teritoriilor ocupate prakticheskina-VHC genotip 3 (15,5% în seruri de la Belorussiido 34,0% - de la Nijni Novgorod). Mult mai puțin studiate syvorotkisoderzhali tip specific anti-NS4 HCV-2. chastotavyyavleniya maximă a acestui genotip a fost instalat în serurile de Belarus (12,7%), Kazahstan (13,7%), iar cea minimă - în serurile de la St. Petersburg (3,8%). In 35 seruri din toate regiunile studiate, cu serotipare a stabilit prezența anticorpilor anti-NS4 genotipuri diferite (genotipuri mixte). Cea mai mare proporție de seruri de la probe smeshannymigenotipami efectuate în care ambele opredelyalisHCV-1 și HCV-3 (26 de 35-74.3%), adică cel mai frecvent vstrechayuschiesyagenotipy. Alte variante de combinații cu znachitelnorezhe - HCV-1 + HCV-2 (8,6%), HCV-2 + HCV-3 (11,4%). HCV-1 + HCV-4 în combinație a relevat două seruri din Georgia (5,7%).

Materialele acestui studiu svidetelstvuyuto că utilizarea peptidelor sintetice, Determinanții sootvetstvuyuschihantigennym non-structurale de proteine ​​NS4, in componenta kachestveosnovnogo immunosorbent ELISA permite uspeshnoopredelyat genotipuri ale virusului in serul infectate oameni etimvozbuditelem fermă și să monitorizeze regiunile de circulație genovariantovvozbuditelya.

Pentru a determina genotipurilor ca ispolzovanmetod grele PCR-RFLP cu restricție specifică de tip fermentamiBst U1 și Bst N1 și analiza ulterioară a produselor de restricție cu ajutorul electroforezei pe orizontală în gel de agaroză 3% (ThiersV. Et al., 1997). Această metodă a fost testat seruri de la pacienți cu krovi15 cronică GS care au primit interferon. RNKvirusa GS detectat în 14 probe, în timp ce în 6 cazuri (42,9%) montate 3a subgenotip, 3 (21,4%) - 1 gentip (2- subgenotip1v 1 - subgenotip 1a). virus ARN GS, izolat de la 4 la obraztsovotnosilas genotipuri patogene rareori detectabile - 4/5. Poslednienahodki necesită o verificare suplimentară.

Tabelul 1. SOPOSTAVLENIE PEZULTATOV OPPEDELENIYAGENOTIPOV VIPUSA GEPATITA Cu METODAMI RFLP și SEPOTIPIPOVANIYA

PPIMECHANIE: * - nu tipipovalos ** - abs.chislo / procentaj;

Tabelul 2. CHASTOTA DETECTARE PAZLICHNYH GENOTIPOVVIPUSA GEPATITA cu metode SEPOTIPIPOVANIYA HA OTDELNYHTEPPITOPIYAH Possii Și SOPPEDELNYH STPANAH

PPIMECHANIE: * - abs.chislo syvopotok cu dannym genotip /% (100 nA cu teppitopii syvopotok ukazannoy)

Referințe:

1. 1.Pohjanpelto P., Lappalainen M., Widell A. et al.// Clin.Diagn.Virol.-1996. -Vol.7. -P. 7-16
2. 2.Simmonds P., Holmes E.C., Cha T.A. et al.// J.Gen.Virol.-1993-Vol.74.-P. 2391 -2399