Conținutul de acid glutamic-Ophthalmology în camera de umiditate la pacienții cu glaucom primar cu unghi deschis

Prin mulți autori glutamat face neurotoxiceffect asupra celulelor ganglionare retiniene. Este posibil ca creșterea concentrației glutamicacid în țesuturile ochiului cu angleglaucoma deschis primar (GPUD) joacă un rol important în patogeneza optic glaucomaatrophy nervoase.

Umoarea apoasă de 10 pacienți cu GPUD au fost luate în timpul cataractextraction și examinate. Cantitățile de acid glutamic weredetermined prin metoda cromatografică.

Concentrația acidului glutamic în umoarea apoasă a controlului groupwas 28,6 ± 1,6 mkg / ml și în grupul cu GPUD - 84,9 ± 28,7 mkg / diferenta ml.The nu a fost statistic fiabile. Astfel, există atendency creșterea concentrației la acid glutamic în ochii withPOAG.

Pcercetare Performan poslednihlet afectează în mod semnificativ prezentarea patogeneza glaukomatoznoyatrofii nervului optic - neuropatie optică glaucomatoase.

Sa constatat că caracteristica este o manifestare a apoptozei neuropatie glaukomatoznoyopticheskoy - moartea lui kletoksetchatki ganglionare. Quigley [6] consideră că deteriorat poate vsledstvievysokogo IOP axon celulelor ganglionare retiniene nu poate fi trasa dostatochnoyinformatsii, ceea ce conduce la activarea mecanismului de gibelikletki natural. Poate că aceste procese sunt activate vasele nedostatochnostyukrovotoka în ochi la o IOP ridicată. S-a demonstrat chtoodnovremenno cu aceasta există o creștere semnificativă de acid soderzhaniyaglutaminovoy (glutamat), în corpul vitros al pacienților pervichnoyotkrytougolnoy glaucom (GPUD). Glutamatul este majore neyromediatoromTsNS și retinei. În același timp, creșterea glutamatavyshe nivelurilor concentrației fiziologice la nivelul retinei care cauzeaza impulsurilor nervoase blocada mezhneyronalnoyperedachi si combinate cu celule retiniene apoptozomganglioznyh selective datorită efectelor neurotoxice de glutamat [5]. Brooks D.E. și colab. [7] găsit în ochii câinelui cu glaucom eksperimentalnovyzvannoy crescut vitreal conținut de glutamat, triptofan, și un conținut scăzut de glicină în comparație cu kontrolem.Po Potrivit autorilor, concentrația mare de glutamat este dlyagangliev toxic mecanism ischemic retinian demonstrează tulburările care apar în celulele retinei.

Însăși ideea unui efect neurotoxic de glutamat pe nervnuyutkan, în special, celulele ganglionare retiniene, zaimstvovanaiz practica neurologice. Neurologi 20 ani znacheniebolshim dau concentrațiile transmițătorului în dezvoltarea unor boli cum ar fi boala Alzheimer, scleroza multiplă, demență, scleroză amiotroficheskiybokovoy și altele [4]. Nivelurile crescute de vitros glutamatav pacienților cu glaucom, moartea kletoksetchatki ganglion sub influența sa în experimentele pe șobolani a permis E.B.Dreyer et al. [6] sugerează că mecanismul de la locul lor și GPUD gibeliimeet. Cu toate acestea, cauza intracelulare nu vypuskaglutamata complet limpede. E.B. Dreyer și colab. [6] cred că presiunea intraoculară probabil ridicată cauzează vyhoduglutamata în spațiu intracelular, care induce moartea celulelor, care este toxic pentru celulele ganglionare. A doua celule prichinoygibeli probabile, potrivit autorilor, este eșecul sistemelor enzimatice responsabile pentru distrugerea neurotransmitator din sinapse după vyhodaego. Dificultatea de a confirma aceste opinii zaklyuchaetsyav că este foarte dificil să se verifice faptele pe ochi „viu“, cu toate acestea, fără îndoială că concentrații mari de țesut nervos gutamata toksichnydlya.

Având în vedere cele de mai sus, scopul studiului nostru a fost obnaruzhenieglutamata la pacienții cu GPUD.

Materiale și metode

Grupul experimental a constat din 10 de pacienți cu GPUD (6 bărbați, 4 femei, vârsta medie - 74 ani) care zabiralaskamernaya de umiditate în timpul componentei kataraktys extracție excizie antiglaukomatoznyh. 8 pacienți au dezvoltat stadieyPOUG 2 cu mult mai avansat. Grupul de control a constat cataracta senila bolnyeso - 14 pacienți (11 bărbați, 3 femei, vârsta medie - 68 ani). Principalele si grupurile de control bylisopostavimy vârstă și a bolilor somatice asociate.

Baza metodei descrise de Bode și pune metode Giri kolichestvennogoopredeleniya derivați de aminoacizi în formă de cupru cu ningidridinomposle separarea lor prin cromatografie pe hârtie în această modificare [1].

1. Pregătirea probelor pentru analiză. Probele kamernoyzhidkosti volum de 0,1-0,2 ml a fost cântărit pe balanță analitică și se evaporă la sec pe o baie de apă la 40 ° C în recipiente de sticlă microplăci folosind trepied plutitoare. Reziduul uscat a fost dizolvat în 0,05 mldistillirovannoy apă.

2. Obținerea de cromatogramelor dimensionale zhidkostiglaza camerei. 20 l din soluția obținută în porțiuni de 5 L, cu ajutorul unei pipete automate este aplicat bumagumarki cromatografice „rapid“ dimensiune de 2 x 27 cm. Metoda provodyatniskhodyaschim pentru cromatografie de două ori, mai întâi într-o singură direcție smesirastvoriteley I, apoi de două ori un amestec II. Amestecul I: n-butilovyyspirt, acidul acetic glacial, apă distilată (4: 1: 5). Un amestec de II: alcool n-butilic, acid acetic glacial, distillirovannayavoda (40: 15: 5). După fiecare transmitere bumaguvysushivayut solvent în aer și apoi plasat într-un solvent pasaj cromatografică kameru.Vremya într-o singură direcție de 7 ore. Vysushennuyuhromatogrammu imersate timp de câteva secunde într-o soluție de 0,5% ningidrinav acetonă, se usucă pentru a deveni mai clare după cuantificarea zi poetomuopredelenie aminoacizilor in cateva minute in aer la 50 ° C pentru dezvoltarea amino okraski.Pyatna ipodogrevayut 10 minute într-un cuptor pentru a fi provoditna următor zi.

3. Determinarea cantitativă a acidului glutamic în ochi kamernoyzhidkosti. pete purpurii glutaminovoykislote corespunzătoare sunt extirpate, tăiate în bucăți mici și plasate într-un microtub care conține 0,25 ml dintr-o soluție alcoolică de sulfat de cupru. Fioletovayaokraska devine obrazovaniyamednogo roșu-portocaliu care rezultă derivatul amino cu ninhidrină. extracție Prodolzhayutv timp de o oră la temperatura camerei. Intensivnostokraski măsurată pe photoelectrocolorimeter Humalyzer 2000 lungime de undă 505 nm pridline în microcuve nabumagu împotriva unui eșantion de control. Calculele bazate pe conținutul aminoacizilor se realizează kalibrovochnomugrafiku obținuți din soluții standard de acid glutamic.

4. Construcția curbei de calibrare. Acid glutamic Gotovyatrastvory 0,001 M, 0,00075 M, 0,0005 M, 0,000375M, 0,00025 M. În lucrare se aplică la 20 de soluții ul. Proizvodyatpo formula de calcul:

K = (C x 5 x 10^-2) / V

A - concentrația de acid glutamic într-o cameră de umiditate (ug / ml) -C - conținut de acid glutamic găsit pe kalibrovochnomugrafiku (ug / ml) - V - volumul probei (ml).

Rezultate și discuții

Conținutul Glutamat de umiditate în kontrolnoygruppe camerei a fost de 28,6 ± 1,6 ug / ml, cu GPUD - 84,9 ± 28,7 micrograme / ml (diferența nu este semnificativă din punct de vedere statistic, p>0,05).

Cu toate că nu se obțin și diferențe semnificative statistic vsoderzhanii pacienti GPUD glutamat si de varsta a cataractei odnakoimeetsya tendință clară spre o concentrație mai mare de pacienti neyromediatorav camera GPUD umiditate. In 5 din 10 pacienți cu soderzhanieglutamata GPUD a fost semnificativ mai mare în camera de umiditate decât în ​​kontrolnoygruppe și a variat de la 37,6 pg / ml până la 260.3 micrograme / ml.

La pacienții cu concentrația cea mai mare cataracta senila glutaminovoykisloty a fost doar de 33 mg / ml.

Participarea anumitor neurotransmitatori în oftalmotonusapokazano reglementarea în lucrări de A. Myagkova [2,3], care au dovedit peptide vliyanieopioidnyh la creșterea PIO, care acționează elektricheskimikolebaniyami și stimulii chimici pe amigdaloid kompleks.V datelor rezultate obținute nu pot fi de acord cu apoptoza gipotezoyusileniya celulelor ganglionare retiniene în GPUD vsledstvienakopleniya de acid glutamic în acesta. Cu toate acestea, acest gipotezatrebuet studiu suplimentar.

Studiile au arătat pentru prima dată în camera de umiditate glutaminovuyukislotu la pacienți cu GPUD. Cuprins glutamatau pacienți GPUD decât în ​​grupul de control.

1. Tehnologie medicală de laborator și de diagnostic: tehnologia Meditsinskielaboratornye. Referință în 2 volume / Ed. A.M.Karpischenko // Determinarea micrometodă de aminoacizi liberi în syvorotkekrovi utilizând cromatografia de hârtie. V.2. - St Petersburg, "Intermedika", 1999. - S. 106-109

2. Soft AV Impact perforați impact oculare cauzate de mindalevidnogokompleksa stimulare electrică și chimică: Avoref. Diss. pe soisk. oameni de știință. pas. Cand. miere de albine. nauk.- Kazan, 1997-1921.

3. AV Soft Participarea peptide opioide la presiune regulyatsiivnutriglaznogo central si ochi hidrodinamice // Proc. oftalmologi Dokladov7sezda Rusia. - M., 2000.- S.175-176.

4. Plyahin IV Baza biochimică prelungită la kletochnoysmerti. // Colecțiile inter-regionale ale științifice. Munca / Biochimie secolului XXI narubezhe. - 2000.- Ryazan. - S.173-177.

5. Shamshinova AM Zueva MV, Tsapenko IV, Yakovlev AA retina Neyrofiziologicheskieosobennosti și posibila electroretinografie clinice .// Vestn. Oftalmol. - 1996.- №2.- S.52-55.

6. Aparitii de glaucom în documentul // slackinc.com), Chirurgie oculara News International Edition, 15 decembrie 1996

7. Vitreousbody concentrației de glutamat la câini cu glaucom / Brooks D.E., Garcia G.A., Dreyer E.B. la toate // Am. J. Vet. Res. - 1997.- Vol.58, N8.- P.864-867