Limfokină-activate celule ucigașe pentru imunizare. Efectul celulelor killer activate de limfokinele în imunitatea înnăscută

IL-2 sau analogi exogeni stimulează proliferarea celulelor killer naturale și de a spori funcția lor citolitică, ceea ce duce la formarea așa-numitului killer activate de limfokine (LAK). Prin natura lor, LAC sunt limfocitele citotoxice, care sunt capabile de a distruge celulele infectate cu virusuri sau bacterii intracelulare și celulele tumorale. În acest moment posibilitatea de a terapiei LAK studiat in diferite forme de cancer. In bolile infectioase metoda de transfer adoptiv LAC practic studiat.
acest întrebarea Am studiat la soareci infectie cultura K. pneumoniae K2 ACB a tulpinii.

ucigaș de limfokine-activat ML preparată din spline de șoareci, când au fost cultivate timp de două zile în mediu RPMI-1640 care conține 1000 UI / ml IL-2, celulele au fost spălate și utilizate în experiment.
studiu Morfogistohimicheskie Ei au arătat că celulele LAK reprezintă un număr mare de limfoid și de tip imunoblast prolymphocytes cu citoplasma bazofile. Frotiurile sunt adesea găsite în diviziunea celulară mitotică a statului. In faza de celule microscopie de contrast LAK reprezinta proliferante conglomerate.

Astfel, atunci când Efectele IL-2 în MT splinele șoarecilor a avut loc generație LAK, caracterizată prin proliferarea și activarea celulelor limfoide. Expresia crescută a antigenelor de activare onnyh care formează caracteristici immunophenotype LAC a depus mărturie, de asemenea, procesele de activare a limfocitelor. In plus, am constatat că LAC a avut activitate killer semnificativ mai mare comparativ cu ML intacte în raport cu linia de celule NK sensibile la murinic limfom YAC-1.

Conform credintei populare, NK - subpopulatii principal al limfocitelor care exprimă IL-2 și activate selectiv și proliferează sub influența sa pentru a forma LAC celule țintă tumorale capabile să eficient lizează lanțului de receptor r75r. Cu toate acestea, împreună cu ideile de mai sus, există dovezi ale existenței populației în ALC NKT celulele care exprimă nu numai NK (CD16, CD56), markeri, dar, de asemenea, antigene de diferențiere a celulelor T (CD3, CD4, CD8).

aceste date se conforma sugerare celulelor NK anterioare, considerate nu numai ca un subpopulație separat, ci și ca o etapă de diferențiere a limfocitelor mature. Din limfocite mature prin incubarea cu IL-2 poate fi preparat prin așa-numitele celule NK-LAK.

În nostru Experimentele ML după cultivare splina cu IL-2 au fost obținute LAC exprimând asupra lor molecula de activare a membranei (CD25) și molecule principale complexe histo-compatibilitate MHC I, MHC II. În același timp, în populația ALC cu excepția NK, celule care exprimă antigene prezente și diferențierii celulelor T (CD3, CD4, CD8).

Cel mai recent, în aceleași cantități au fost detectate în populația inițială ML. Tehnologia utilizată obținerea killer activate de limfokine Aceasta a oferit o creștere semnificativă a celulelor NK 1,5 până la 20,3%, iar celulele care conțin moleculele de markeri CD25 si prezentarea antigenice MHC I și II.

rezultante Celulele killer activate de suspensie limfokinele- a fost administrat la șoareci intraperitoneal la 2,5 x 106 celule în 0,5 ml de soluție de clorură de sodiu 0,9%. Apoi, injectați intraperitoneal cu 250 celule într-un volum de 0,5 ml de K pneumoniae K2. Ca martori au fost utilizate ML cultivate în prezența PHA (10 ug / ml).

ucigaș de limfokine-activat infectat K. pneumoniae (100 LD 50) soareci asigura supravietuirea 100% din animale, la practic administrarea intraperitoneală simultană a celulelor microbiene și ucigaș. ML, PHA activat, protejat la 50% la 100% ucidere a șoarecilor care au primit intacte infectarea cu aceeași doză.
Cercetările noastre confirma studiu de fezabilitate privind utilizarea LAC pentru imunoterapia adoptivă, introdus în șoareci intraperitoneal LAC K. pneumoniae K2 previne dezvoltarea bolilor la animale.

La determinarea citokine în mediu de cultură au fost detectate ALC au crescut conținutul de IL-1, după 24 de ore și 72 h de incubare (254 + 12,3 pg / ml și 213 ± 11,5 pg / ml) după 72 de ore - IL-6 (224 ± 21 2 pg / ml) și IL-10 (150 ± 10,5 pg / ml), comparativ cu cultura ml (conținutul acestor citokine în controalele nu depășesc 25-80 pg / ml), incubat fără IL-2. Interesant, în mediul de cultură LAC nu a crescut conținutul de IL-12 de reglementare, că suntem în cantități substanțiale determinate în mediul de cultură DK.

citotoxice activitatea killer activate de limfokine, derivate din splinele șoarecilor (CBA) a fost determinat pe NK sensibile YAC-1 linia de celule murine de limfom în 3- recuperare Test (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazoliu (MTT-test). Celulele tumorale (1 x 104 în 1 ml) au fost incubate în mediu de cultură cu LAK în diferite proporții și prin absorbanța la 540 nm a fost calculat procentul de liză a celulelor tumorale (citotoxicitate la suta).
Activitatea killer Calificarea celulelor efectoare a arătat că posedă LAC semnificativ mai mare NK-activitate comparativ cu șoarecii intacte ML.

La un raport de 1: 5 LAK și celulele tumorale limfom Murine YAC-1 Activitatea citotoxică a celulelor killer a fost crescut de 6 ori mai mare în comparație cu ML. În aceste condiții, 15,5% ML lizată linia celulară K562, în timp ce în condiții similare LAC cauzat moartea 92,2% din celulele tumorale (p < 0,01). В меньших соотношениях мишени/эффекторы (1:2 и 1:1) эти различия не столь значимы, хотя цитотоксическая активность ЛАК превышает таковую у МЛ интактных мышей.