Translația ARNm-ului. Caracteristici de translație ARNm sub sinteza de anticorpi

Activitatea biologică Preparatele de ARNm izolat

Pentru traducerea ARNm Sistemele fără celule folosesc trei tipuri de Krebs hepatom ascitic (Swan ea, 1972- Schechter, 1973 ..). iepure reticulocite (Stavnezer, Huang, Mach e 1971. a., 1973- Cowan e. a., 1976) și grâu răsadurilor (Schechter, Burstein, 1976- Storb, Marvin, 1976). Cel mai convenabil, aparent, este ultimul sistem. Randamentul precursor marcat în ea este de 0,1 pmol sau 2,6 ng la 0,007 unități introduse A2vo ARNm (Schechter, Burstein, 1976).

Deoarece la această provocare etapă descris cercetare este de a studia capacitatea potențială de translație a ARNm și sistemul de celule libere de plante și animale, în principiu, să se comporte în acest sens aceeași (Schechter, Burstein, 1976), gradul de adecvare și avantajele unui sistem evident depinde de următorii trei parametri: dimensiunea proteinei endogene sinteza (inferior atat mai bine), disponibilitatea și simplitatea ingredientelor necesare și cantitatea de ARNm care trebuie făcută în sistemul de obținere a proteinei de fuziune investigate fiabile.

Video: Procesul de difuzare pentru schimbul de plastic

analog un sistem fără celule, uneori, servesc ca ovocitelor de broască. S-a arătat (Smith e. A., 1973) că introducerea în oocite ale lanțurilor de ARNm care codifică imunoglobulină., Conduce la sinteza acestor lanțuri. Această metodă este însă mult mai complicată și necesită cantități semnificative de ARNm.

Video: Curs 3. Transcriere, Traducere

Cele mai multe experimente realizată prin radiodifuzare cu ARNm care codifică sinteza L-lanț (L-ARNm), deoarece separarea lor este mult mai ușor decât izolarea ARNm care codifică pentru sinteza H lanțurilor (H-ARNm). Learning produse ale ARNm care codifică traducerea imunoglobulinelor de mielom L-lant a condus la un rezultat neașteptat. Sa constatat că ARNm în sistemele fără celule codifică sinteza polipeptidelor (precursor) mai mare în dimensiune decât matur L-lanț. Formarea unui prim produs greu sub acțiunea 41 celulele 13S ARNm plasmocitoame MOPC descrise Swann et al (Swan e un 1972..) Sub acțiunea 10-14S ARNm din celulele plasmocitoame MOPC 21 -. Milstein și colab (Milstein și f,. 1972). Greutatea moleculară a produsului rezultat a fost mai mare decât greutatea moleculară a respectivelor L catenele (1500), din care sa ajuns la concluzia că acesta conține 15 resturi de aminoacizi suplimentare.

ca atunci când este adăugat la un sistem fără celule 355-formil-ARNt ca sursă unică etichetează 355-metionil detectată într-o componentă grea, sa ajuns la concluzia că cel puțin o parte din acești aminoacizi suplimentari localizate la molecula L-catena NH2-koitse (în eucariotele sinteza lanțurilor polipeptidice începe cu metionina de incluziune) . Sinteza precursorilor de date au fost ulterior confirmate în experimente cu ARNm "sinteză care codifică xL-lanțuri MOPC 70E (Toncgawa, Baldi, 1973), MPC" (Storb, Marvin, 1976), MOPC 41 (Mach ea, 1973), MOPC 321 ( Schechter, Burstein, 1976), MOPC 63 (Schechter e. a., 1976) și L-lanțuri MOPC 104E (Burstein e. a., 1976).