Tehnici

Testarea ustensile și dispozitive de colectare a fluidelor corporale (Nechiporenko, 1999)

Algotest pentru a cuantifica activitatea biologică a compușilor chimici (Barashkov, Kiristaeva 1977)

Pregătirea probelor pentru analiză multi-element al instrucțiunilor metodologice ale rus de inspecție Federală sanitară Centrul Muk 4.1.1483-03

Metoda Formularea de determinare a plumbului din sânge integral prin ICP-MS de diluție a izotopilor (pascal și colab., 1995)

Analiza Metoda multielement de fracțiuni de sânge

(Metoda de modificare Prebsting și Gavrilova Timofeeva pentru determinarea activității N-acetiltransferaza) Compuși Determinarea sulfamidele (Pershyn 1971)

Testarea ustensile și dispozitive de colectare a fluidelor corporale (Nechiporenko, 1999)

Containere de testare (tuburi, fiole), seringi de tip sisteme „fluture“ (seringi de plastic și tuburi).

1. Solvent: amestec de 1% HNO₃ și 0,001% Triton X-100. Preparat folosind apă distilată. 10 ml de HNO₃ (Reactiv grad) a fost adăugat la 500 ml de apă pură într-un balon gradat de 1 litru. Apoi se adaugă 1 ml de Triton X-100. După dizolvare, volumul amestecului a fost ajustat la 1 litru.

2. Pentru testarea seringi de plastic, recipiente, capilare in interiorul obiectului se face și 1 ml de solvent este transferat la tubul de analiză. În cazul în care soluția este păstrată în interiorul containerului inversat pentru capac sau dop recipientului pentru 12-14 ore. În cazul ace metalice de testare sunt trecute prin 1 ml de soluție. Apoi, toate analiti testate individual pentru conținutul de metale.

3. Toate calculele au fost efectuate pe 1 ml de soluție. Conținutul total al metalului total din toate dispozitivele nu trebuie să depășească 5% din echivalentul mediu nivelul calculat al conținutului de metal în proba biologică.

Algotest pentru a cuantifica activitatea biologică a compușilor chimici (Barashkov, Kiristaeva 1977)

In certificatul de inventator de mai jos, descrisă lui № 557098. obținut în algotest 1977 g. Cu toate ca punct de vedere tehnic, această metodă nu este foarte complicat, este necesar să îndeplinească mai multe condiții, în special, pentru a asigura prezența lyuminostata (lămpi de iluminat fluorescente continuu fluorescente, cu o intensitate de 3700 erg / cm² sec, temperatura de incubare de 29 ± 3 ° C) și au experiență cu alge.

Testul organism mezofilă este o tulpină de alge verzi Chlorella pyrenoidosa 82 din colecția de cafenele. MSU microbiologie. Este cultivat de 3 zile sub lumină continuă, o lampă cu incandescență cu o intensitate din 10 ianuarie⁵ ergi / cm² s la 28 ° C complet mediu Tamiya uree și a adăugat microelementelor în Arnon-4 soluție.

Inainte de celulele experiment de alge (faza de creștere mid-log) este separat de mediul prin centrifugare (3 tys.ob / min, 1200g, 5 min), se spală cu 0,01% sodiu NaCl și diluat De 5 ori Ipoteză-1 mediu cu un pH de aproximativ 7,0, este complet lipsit de aditivi organici.

Concentrația optimă a celulelor de alge pentru sensibilitate maximă (10 mai⁵ - 10 aprilie⁶/ Ml) corespunzătoare 15-40 unități „index gel de silice“ (SP), care este egală cu masa de suspensie în silice fumigenă CSC mg / ml cu aceeași densitate optică la 578 nm ca suspensie de alge.

La evaluarea toxicității substanțelor sau amestecuri ale acestora sunt posibile opțiuni legate de solubilitatea substanțelor de testat. Substanța solubilă în apă este introdusă în suspensia la concentrații care diferă de o singură comandă, de exemplu, 10, 1, 0,1, 0,01 mg / ml. substanță insolubilă în apă în sverhrastvoritele administrat, de exemplu, dimetilsulfoxid (DMSO) sau dimetilformamidă (DMF). concentrația de Sverhrastvoriteley nu trebuie să depășească 3% datorită toxicității lor inerente.

Fierte experimental și de control cu ​​o suspensie inițială identică SP₍₁ se toarnă în flacoane 20-25 gura larg ml sau Erlenmey-EPA (50-100 ml) sau în eprubete standard în rafturi transparente, închise cu bumbac și incubate la 85-95 ora lyuminostate. Punct de vedere tehnic convenabil și satisfăcător pentru prelucrarea statistică pentru a repeta fiecare opțiune de 5 ori.

După incubare (flacoane sau tuburi) au fost plasate într-o baie de ultrasunete și curat ultrasunetelor iradiat timp de 10-15 sec cu 100 de wați pentru a obține o suspensie omogenă. Acestea definesc experiența JV și control (JV_K) Prin absorbanța la 578 nm (sau numărul de celule). Calculele efectuate de formula:

unde% T₂ - modificarea procentuală a timpului de dublare culturii. Un rezultat pozitiv indică prezența creșterii pipernicit și efectul toxic, un negativ - un efect de stimulare.

Concentrația critică (C_cr) Sunt grafic. Axa ordonatei reprezintă valorile calculate ale% T₂ (Deasupra 0 - pozitiv, inferior - negativ), iar abscisa - concentrația substanței de testat pe o scară logaritmică. Se pune intersecția unui segment de linie între punctele cu valori mai mari și mai mici% T₂ nivelul de 5%, paralel cu axa absciselor dă valoarea lui K_cr- 5% este acceptat ca nivelul critic, datorită faptului că anumite substanțe nu produc un efect stimulator clar, și să scadă sub 5 mărește eroarea relativă în determinarea.

Un rezultat de expresie foarte convenabil este, în plus față de K_cr, Toxicitatea Exemplu de calcul în raport cu toxicitatea sulfatului de cupru pentru „Tox“ (T_cu), Identificat în aceeași serie de experimente: T_cu = K^cu_cr/ K_cr. Selectarea ca standard de toxicitate model de CuSO₄ datorită faptului că acest material îndeplinește următoarele două cerințe: 1) este cel mai larg ca model de fluor și 2) furnizează o valoare clară K^cu_cr la minim diferența dintre concentrațiile toxice și stimulatoare.

POTE: De la fenomene de toxicitate selectivă, rezultă că organismele de testare universale nu există. Testele cunoscute, cum ar fi testul cu dafniilor, pe baza determinării LD₅₀, care, practic, permite stabilirea concentrației critice a substanței de testat, adică un organism superior, care este inhibat activitatea vitală. În plus, organismul testat pentru experimente ar trebui să fie în stare fiziologică standard la orice moment al anului. Această cerință este cea mai potrivită pentru o singură celulă de alge verzi.

Utilizarea tulpinilor mezofile de Chlorella face posibilă creșterea sensibilității biotestului în comparație cu orice alt cu mai mult de două ordine de mărime, un mod foarte simplu. Pre-tulpina crescute în mediu complet cu uree, adică mezotrofa. Celulele au fost apoi spălate de mediu și sa mutat în autotrofe săraci condiții, care este supus șocului fiziologic dublu.

Necesitatea de a introduce toxicitate standard intern provine din incapacitatea de a efectua experimente in diferite anotimpuri, în aceleași condiții. K^cu_cr Aceasta variază de la experiment la experiment, dar în cele mai multe cazuri este de aproximativ 3 mg CuSO₄/ L.

Pregătirea probelor pentru analiză multi-element al instrucțiunilor metodologice ale rus de inspecție Federală sanitară Centrul Muk 4.1.1483-03

Pentru prepararea probei folosind ICP-MS pentru a fi utilizate preparate fluoroplastic spălate minuțios în baie cu ultrasunete diluat 1: 1 HNO₃ și clătite de trei ori cu deionizata H₂O.

Selectarea, depozitarea și pregătirea probelor

păr tăiate la partea din spate a capului, în valoare de >0,1 g, a fost tratat cu acetonă timp de 10-15 minute, se spală de 3 ori cu deionizata H₂oh.

cuie tăiat cu ambele mâini, și tratate în același mod. Ambele obiecte sunt stocate în plicuri de hârtie.

sânge din vena ulnar într-o cantitate >1 ml depozitate în frigider timp de 3-5 zile sau într-un congelator (18 ° C) sau liofilizat. Pentru depozitarea pe termen lung, probele au fost plasate într-o tuburi de polipropilenă de unică folosință, cu capace strânse.

De asemenea, tratate de sânge în prepararea medicamentelor ambalate celule roșii din sânge, plasmă și seruri, iar eșantionul lapte, material seminal, limfa, saliva.

urină (Dimineața sau zilnic) într-o cantitate de cel puțin 5 ml a fost plasată într-un recipient de plastic sigilate în frigider până la 3 zile sau congelat.

biopsii musculare, piele, epiteliale, ficatul, și altele. imediat după preparare este cântărit, plasat într-un vase din plastic sigilate și păstrate în frigider timp de 3-5 zile sau congelat.

Probele de oase și dinți a fost plasat într-un ambalaj din plastic sigilată din laborator.

Preparate aminoacizi, multivitaminele, BAS și materii prime pentru producerea acestora vine în pachet producătorului. Greutatea minimă a preparatelor solide 10 g, lichid - 100ml.

Descompunerea deschis probelor

Părul, unghiile și altele. Probe solide. O porțiune din probă plasată într-un cilindru de teflon a fost adăugat 0,2-1,0 ml concentrat HNO₃, film de laborator capac de protecție și plasat într-un termobloc la 0,5-1,0 ore la temperatura de 115 ° C până la dizolvare completă. Proba a fost dizolvată cantitativ transferată într-un tub de măsurare și spălări cu apă a fost ajustată la un volum de 10 ml, apoi - pe analiza.

Video: Max OT. tehnici de formare

probe lichide. eșantioane (0.1-0.5 cantarite cu precizie ml) a fost plasat într-un cilindru de teflon, determinarea greutății tuburilor de probă diferență de masă înainte și după preparare a probei. S-a adăugat 0,3-1,0 ml concentrat HNO₃ și proba omogenizată așa cum este descris mai sus.

Pentru a preveni depunerea de proteine ​​și de a compensa pentru probele cu viscozitate mare a permis o simpla diluare a probei cu apă deionizată urmată de acidularea cu un factor de diluție de cel puțin 1: 100.

descompunere microunde

eșantion cântărit cu precizie este plasat în căptușeala de teflon, 5 ml HNO₃ și a pus într-un cuptor cu microunde. Descompunerea se realizează de către producătorul de program (de obicei 5 minute la 200"C) cantitativ transferate într-un tub de testare și volumul ajustat la 10 ml cu apă. O probă de 1 ml a fost ajustată la un volum de 10 ml 0,5% HNO₃ și analizate.

Permis selectarea directă a unei alicote din volumul probei descompus de 0,1-0,5 ml. Pentru a compensa erorile înainte de a se descompune diluarea probei introdus standard intern (In, Rh) La concentrația de analit în soluția finală a fost de aproximativ 10 g / l. Soluția standardului intern trebuie adăugat la toate soluțiile unice și de calibrare.

Corecția Isobar se suprapun, suprapuneri de polihidrici și zgomotul produs de trafic

Tehnici de depanare Interferența detectate prin determinarea însumare standard și măsurarea serie de probe diluate în serie.

corecție izobară Suprapunerile produs în mod automat, în conformitate cu pachete software de instrumente pentru ICP-MS. Coeficienții de corecție exactă determinată experimental.

corecție polihidroxilic suprapuneri necesită atenția operatorului pentru a elimina interferențele. Dispozitivele cu celula de reacție este îndepărtată majoritatea suprapunerilor poliatomice în principiu. Metode specifice pentru diferite exemple de realizare pentru a elimina manual interferența sunt cunoscute și sunt prezentate în instrucțiunile respective la dispozitivul existent.

zgomot produs de trafic prin corectarea posibila diluare și de fond de acid maxim de normalizare. Folosirea unui standard intern elimină erorile de diluare prin sondaj și să includă multe dintre efectul matricei asupra fluxului plasmatic și ioni.

Calibrarea instrumentului, măsurarea, analiza măsurătorilor și efectuarea controlului operațional intern descris în instrucțiunile corespunzătoare pentru instrument. producătorii de echipamente pentru a efectua o formare adecvată pentru operatori în cadrul contractelor de furnizare de echipamente.

Metoda Formularea de determinare a plumbului din sânge integral prin ICP-MS de diluție a izotopilor (pascal și colab., 1995)

eșantion cântărit cu precizie de sânge integral doi 0,5 La un adăugat aproximativ 100 mg de soluție (circa 100 microlitri) standardului SRM 983 conținând 92.15% at. ²⁰⁶Pb la o concentrație finală de aproximativ 1 mg Pb/ G. În două părți alicote au fost adăugate 2 ml de ultrapură concentrate HNO₃ și le arde într-un cuptor cu microunde în vase PTFE ponderate.

Reziduuri răcit, transferat într-un tub de 15 ml și se diluează la 10 ml cu apă. Alicotele au fost analizate prin ICP-MS și determinarea raportului ²⁰⁸Pb/²⁰⁶Pb. concentrare Pb în proba inițială a fost calculată cu ajutorul formulei:

în cazul în care [Pb] - concentrarea Pb într-o probă necunoscută în ng / g,

K - raportul dintre masa atomică relativă naturală Pb la masa atomică relativă Pb în eșantion cu adaos ²⁰⁶Pb (A_r = 206.063)

c_s - concentrația Pb în eșantion cu adaos ²⁰⁶Pb în ng / g,

m_sp - greutate (g) s-a adăugat o soluție de ²⁰⁶Pb,

m_sm - greutate (g) din proba inițială,

0,0125 - conținutul relativ ²⁰⁸Pb în eșantion cu adăugat SRM 983

0.921497 - conținut relativ ²⁰⁶Pb în aceeași soluție,

208/206 (e) - raportul în soluția adăugată,

A₂₀₆ și A₂₀₈ - conținut naturale ²⁰⁶Pb și ²⁰⁸Pb în proba originală.

Analiza Metoda multielement de fracțiuni de sânge

pentru plasmă în mod tipic într-o structură standard tub de plastic aparținând anticoagulant (heparină-Na sau -Li sare, K₂-EDTA Trilon B = 9citrat NC Na, oxalat) Ia-o probă de sânge. Celulele trebuie să fie separate, cât mai curând posibil prin centrifugare, ca efect scurtă durată a heparinei și anticoagulant modifică semnificativ compoziția elementară a serului. Pentru depozitarea pe termen lung a probelor de sânge în frigider este proces inevitabil de hemoliză apar și în congelator celulelor sanguine sunt distruse.

pentru seruri se lasă proba de sânge coagula ( „Curl“), după care cheagul de fibrină se separă împreună cu celulele. Dacă doriți să obțineți filtratul lipsit de proteine (BBF), apoi la 1 parte de sânge adăugat 9 părți 5% TCA (TCA). Precipitatul proteic este îndepărtat prin centrifugare (2-lea. Rev / min, 10 min). Pentru determinarea elementelor supernatantul a fost utilizat.

0,5 ml de sânge sau plasmă sau ser este plasat într-un flacon cu microunde a fost adăugat 4,5 ml de 30% HNO₃. conținut mineralizate (De exemplu, într-o firmă cuptor cu microunde Berghof Speedwave ™ MWS-2 Programul P₆ un proces în 3 etape (25 min)).

soluție mineralizată a fost diluat cu 5% HNO₃ la 10 ml (diluție de 20 ori) și utilizate pentru determinarea ICP-MS.

remarcă: În cazul rezultatelor la scară off pentru elementele individuale ale analitului diluat. Toate diluții în considerare în ultimele minute ale rezultatelor.

Compușii Determinarea sulfamidele (Prebsting și Gavrilova Timofeeva metodă de modificare pentru determinarea activității N-acetiltransferaza) (Pershin, 1971)

Reactivi:

1) 15% acid tricloracetic (TCA)

2) soluție 0,5% NaNO₂

3) O soluție saturată de CH₃COONa (1 parte sare se dizolvă în 2,8 părți H₂O)

4) soluție 0,5% din acetilat H-Acid (1,8-aminooksinaftalin-3,6-disulfonic) (preparată în ziua experimentului)

5) soluție 7-10% HCI

6) Principala soluție etalon

10 mg norsulfazola sulfadimezin sau plasat într-un balon cotat de 100 ml și 2,1 ml de 0,1 N NaOH pentru a dizolva complet sulfanilamidă. completat cu distilat H₂O până la semn, adică înainte de a concentrației de medicament 100 ug în 1 ml de soluție. Soluția a fost depozitată într-un frigider.

O curbă de calibrare a fost construită folosind o serie de soluții pentru a studia medicamente luate pentru analiza photoelectrocolorimeter (FEC), cu un filtru albastru, de exemplu, 10-8-6-4-2 ug / ml.

Subiectul se administrează 1-2 comprimate de sulfamide și se colectează urina de zi cu zi. Tubul este umplut cu 0,2 ml a fost adăugat de urină 2 ml soluție №1 + 1 № 5 ml și 6,8 ml de distilat H₂O. După agitare și filtrarea 1 ml de filtrat corespunde cu 0,02 ml de urină.

Analiza sulfanilamidă liber. În eprubetă se toarnă 2,5 ml de urină filtratului se toarnă 0,1 ml soluție № 2, se agită și după 10 min se toarnă 1,5 ml soluție № 3 și se amestecă din nou. Imediat, 0,25 ml dintr-o soluție № 4. După amestecare completă apare o colorație roz. După 15 minute, intensitatea se măsoară pe FEC cu un filtru albastru.

standarde de lucru tratate Tate aceeași. Prin curba de calibrare concentrația de medicament liber a fost calculată luând în considerare toate diluțiile.

Analiza sulfanilamidă totală. La primirea medicamentului în corpul subiectului acetilat N-acetiltransferaza. Această parte poate fi determinată numai după hidroliză. În eprubetă se toarnă 2,5 ml probă și 0,25 ml № 5. De asemenea, de asemenea, lucrează cu soluții standard. Tubul cu amestecul este plasat în baie de apă care fierbe timp de 30 min. După răcire, volumul de lichid din tubul a fost ajustat la 2,5 ml de distilat H₂O. lucrează în continuare cu soluția conform metodei de determinare a sulfanilamidei liber.

O curbă de calibrare construită cu soluție de lucru standard, după hidroliză, se calculează cantitatea totală de medicament (liber și acetilate) în eșantion. După scăderea cantității de medicament liber obținut în cantitatea de preparat acetilat %% în raport cu totalul.

bioneorganika Medical. GK oaie