Fiziologia microorganismelor: proprietățile de cultură de bacterii, izolarea culturilor pure de microorganisme

Proprietăți culturale bacterii

conținut

Proprietăți culturale bacterii
Izolarea culturi pure de microorganisme

Pentru cultura proprietăți (sau macromorphological) includ caracteristici ale creșterii microbiene pe medii nutritive solide și lichide. Pe suprafața medii nutritive solide, în funcție de cultură, microorganismele pot crește sub formă de colonii, accident vascular cerebral sau a gazonului continuu.

Colony numit un grup izolat de celule ale unei specii, cultivate dintr-o singură celulă (clona). În funcție de locul în care microorganismul este în creștere (pe suprafața medii nutritive solide sau în ei mai groase) distinge suprafața, adâncimea și colonia de jos.

Coloniile cultivate pe suprafața mediului, sunt variate: ele sunt specifice speciei, iar studiul lor este folosit pentru a determina o cultură accesoriu specific în studiu.

În descrierea coloniilor iau în considerare următoarele caracteristici:
1) Forma Colony - rotundă, amoeboid, rizoidnaya, incorecte, etc;..

2) dimensiunea (diametru) colonii - foarte mici (punct) (0,1-0,5 mm), mici (0,5-3 mm), dimensiune medie (3-5 mm) și mare (mai mare de 5 mm în diametru );

3) Suprafața Colony - este netedă, aspră, îndoită, încrețită, cu cercuri concentrice sau radial striați;

4) profil Coloniile - plate, convexe, conice, crateriform etc;..

5) transparență - o plictisitoare, mată, lucioasă, transparentă, pulverulent;

6) Culoarea coloniei (pigment) - incolor sau pigmentate (alb, galben, auriu, rosu, negru), evidenția selectarea pigment într-un mediu cu o colorație a acestuia;

7) Marginea coloniei - neted, ondulat, zimțată, franjurate, etc;..

8) Structura coloniei -, margine struychataya- omogen, fin sau grosier granulată și o structură de colonie este determinată folosind o lupă sau un microscop la o mărire redusă prin plasarea vasului Petri cu semănatul pe scena microscop jos capacul;

9) determină consistența kolonii- atingând bucla: colonie poate fi dens, moale, încarnat în agar mucozală (pentru întinde în buclă), friabil (ușor de spart în contact cu bucla).

Coloniile profunde se aseamănă adesea lenticele mai mult sau mai puțin aplatizate (ovaluri formă cu capete ascuțite), uneori bucăți de lână cu fanere filiforme la mediul de cultură. Formarea de colonii adânci adesea însoțită de ruperea mediului dens, în cazul în care microorganismele izolate de gaz.

Coloniile de fund au, de obicei sub forma de filme subtiri transparente, târâtor de-a lungul partea de jos.

Caracteristici colonii pot varia cu vârsta, ele depind de compoziția temperaturii culturii mediului și.

Creșterea microorganismelor în mediul lichid în considerare, folosind cultura-patru șapte zile cultivate în condiții staționare.

În medii lichide în timpul creșterii microorganismelor se observă turbiditatea mediului, formarea unui film sau a reziduurilor.

Când cultivate pe semi (0,5-0,7% agar) medii nutritive microbi mobili provoca o ceață pronunțată, încă formează cresc doar în cursul plantarea înțepătură miercuri.

Adesea, creșterea microbiană este însoțită de pigmentare miros de dioxid de mediu. Mirosul caracteristic al unor culturi de specii bacteriene asociate cu formarea diferiților esteri (uksusnoetilovogo, uksusnoamilovogo și colab.), Indole, mercaptan, hidrogen sulfurat, scatol, amoniac, acid butiric.

Capacitatea de a forma pigmenți este inerent în multe tipuri de microorganisme. Natura chimică a pigmenților diverse: carotenoide, antociani, Melanine. Dacă un pigment este insolubil în apă, cultură colorată nalet- numai dacă este solubil, vopsit și mediu nutritiv. Se crede că pigmenții protejează bacteriile de acțiunea distructivă a razelor solare, astfel încât aerul ca bacteriile mult pigmentate, în plus, pigmenți sunt implicate în metabolizarea acestor microorganisme.

În natură, există așa-numitele bacterii fosforescente culturi care strălucesc în lumina verzuie-albăstruie sau gălbui închis. Astfel de bacterii se găsesc în principal în râu sau apă de mare. Pentru bacterii luminescente - photobacteria -otnosyatsya bacterii aerobe (Vibrio, coccidiostatice, tije).

Izolarea culturi pure de microorganisme

Cultura pură se numește o cultură care conține o specie de microorganisme. Izolarea culturi pure de bacterii etapa de cercetare bacteriologică in laborator -necesara, pentru a studia diverse contaminare microbiană a mediului și, în general, pentru orice lucrare cu microorganisme.

Materialul de testat (apă, sol, aer, produse alimentare sau alte obiecte) conține de obicei, asocierea germenilor.

Izolarea culturii pure ne permite să studiem caracteristicile morfologice, culturale, biochimice, antigenice și alte, în funcție de totalitatea care este determinată de tipurile și tipurile de membru al agentului patogen, adică. E. produse identificarea lui.

Pentru izolarea culturilor pure de microorganisme sunt tehnici folosite, care pot fi împărțite în mai multe grupe:
1. Metoda Pasteur - diluție în serie a materialului de testat într-un mediu nutritiv lichid, la o concentrație de o celulă într-un volum (semnificație istorică).

2. Metoda Koch ( „placă de cabluri“) - o diluție în serie a materialului de testat în agar topit (temperatura 48-50 C), urmată de umplerea într-un vas Petri unde agar se solidifică. mărci însămânțarea, de regulă, de trei sau patru ultima diluție, în cazul în care bacteriile devine rară în viitor, cu o creștere de vase Petri apar colonii izolate sunt formate dintr-unul din celula mama originală. Din colonii izolate în adâncimea agarului sunt culturi pure de bacterii asupra mediului reînsămânțarea proaspete.

3. Metoda Shukevich - utilizată pentru a obține culturi pure de Proteus și alte microorganisme care au „târâtor“ creștere. Insamantarea materialul de testare pentru a produce apă de condens în partea inferioară a pantei. bacterii motilitatii (Proteus) sunt în măsură să meargă în sus pantă cultura, forme și mai rămân să crească în partea de jos, locul de inoculare. Subcultura marginile superioare ale culturii, este posibil să se obțină o cultură pură.

4. Metoda Drigalski - utilizat pe scară largă în practica bacteriologic, materialul de testat diluat într-o eprubetă cu soluție salină sterilă sau bulion. O picătură a primului material este introdus în paharul cu spatulă de sticlă sterilă și răspândit pe suprafața mediului. Apoi, aceeași spatula (nu arde prin ea în flacăra arzătorului) fac aceeași cultură în a doua și a treia plăci.

Cu fiecare inoculare de bacterii pe spatula este mai puțin și mai puțin, și placate pe o a treia ceașcă, bacteriile vor fi distribuite pe suprafața mediului de cultură separat unul de altul. După 1-7 zile într-un incubator păstrarea cupe (în funcție de rata de creștere a microorganismului) în a treia cupa dă fiecare clonă de celule bacterie izolată formatoare de colonii care subcultivat pe agar înclinat pentru a se acumula o cultură pură.

5. Metoda Weinberg. dificultăți deosebite apar în alocarea culturi pure de anaerobi obligatorii ai. În cazul în care contactul cu oxigenul molecular nu cauzează moartea imediată a celulelor, cultura produsă prin metoda Drygalski, dar apoi plasat imediat într-o ceașcă de anaerobă. Cu toate acestea, cele mai multe sunt metoda de reproducere. Esența ei constă în faptul că diluarea materialului se desfășoară în topit și răcit la 45-50 ° mediu agar.

Asigurați diluții seriale de 6-10, apoi mediul în tuburi este răcit rapid și turnat strat de suprafață dintr-un amestec de parafină și ulei de parafină, în scopul de a preveni pătrunderea aerului în interiorul mediului nutritiv. Uneori, mediul de cultură după însămânțare și agitarea a fost transferat într-un tub steril sau capilar Burri pipetă Pasteur, ale cărui capete sunt sigilate. În cazul în care creșterea de succes în tuburi, tuburile Burri, Pasteur anaerobi cu pipeta cresc colonii izolate. media Utilizarea cultură, a clarificat faptul că coloniile izolate au fost vizibile în mod clar.

Pentru a extrage izolat tub colonii anaerobi încălzit ușor se rotește în flacără, cu agar, adiacent pereților, iar conținutul tubului se topește ca o coloană de agar alunecă într-un vas Petri sterilă. Coloana de agar se taie cu ajutorul unei pensete sterile și se îndepărtează bucla coloniei. colonii extrași au fost plasate într-un mediu lichid, favorabil dezvoltării microorganismelor alocate. mediu agar suflat din tubul Burri, trecerea gazului printr-un dop de bumbac.

6. Metoda Hungate. Când ei doresc să obțină colonii izolate de bacterii la o sensibilitate deosebit de mare la oxigen (aerobi strict) folosind metoda tuburilor rotative Hungate. La acest mediu agar topit inoculat cu bacterii, la un curent constant prin gaz inert tub eliberat de impuritate oxigen. Tubul a fost apoi acoperit cu un dop de cauciuc și plasat orizontal într-o clemă, rotative probirku- miercuri distribuite uniform pe pereții tubului și se solidifică în strat subțire. Aplicarea unui strat subțire de un tub umplut cu un amestec gazos permite obținerea de colonii izolate în mod clar vizibile cu ochiul liber.

7. Izolarea celulelor unice folosind un micromanipulator. Micromanipulator - un dispozitiv care permite unei micropipete sau mikropetli speciale îndepărtarea o celulă din suspensie. Această operație este controlată sub microscop. Pe scena unei camere de umiditate set microscop, în care medicamentul este pus „agățat picătură“. Posesorii trepiedele care operează micropipete fixe (mikropetli), mișcarea care, în câmpul vizual al microscopului realizate cu microni precizie datorita unui sistem de șuruburi și pârghii. Cercetătorul caută într-un microscop, celule singulare micropipete preia și le transferă în eprubete ce conțin mediu lichid steril pentru a se obține o clonă de celule.

LV Timoșenko, MV Chubik

Distribuiți pe rețelele sociale:

înrudit