Endocrinology enzime proteolitice efect asupra activității metabolice a celulelor creierului și leucocite neutrofilice șobolani albinoși

Este cunoscut faptul că enzimele proteolitice (tripsina, chimotripsina și altele), în unele cazuri, au un protivovospalitelnoedeystvie pronunțat. În acest sens, enzimele relativ proteaza shirokoispolzuyutsya pentru tratarea diferitelor grupe de boli inflamatorii: bronho pulmonare, ginecologice, stomatologică, opuholevyhprotsessov (2,7,14), precum și în prevenirea inflamației în chirurgie (6). mecanisme de procese inflamatorii Între timp profilactic si terapeutic deystviyaproteoliticheskih fermentv ostayutsyanedostatochno studiat. Cel mai complet aprins și rolul literaturii necroza argumentirovanav și efect fibrinolitic (trombolitic) proteazelor în efectul lor anti-inflamator (5,6). Cu toate acestea, literatura puține dovezi ale unui efect direct al proteazelor asupra celulelor metabolicheskuyuaktivnost.

Lucrarea a avut ca scop tripsina issledovanievliyaniya experimentale și kalikreina pe aerobnogookisleniya activitatea enzimei in celulele nervoase si macrofage joaca un prevenirea Rolv lider inflamatiei (gematoentsefalicheskiybarer).

Materiale și metode.

Experimentele au fost efectuate pe 61 șobolani albi masculi populație Vistarmassoy 200-250 g Realizat 10 serii de experimente: 6 serii - de control care au studiat activitatea dehidrogenazei în sistemul leykotsitahi neutrofile "neuron-neuroglia" mozgaintaktnyh cortexul animalelor prin injectare intraperitoneală de 0,85% sodiu rastvorahloristogo tripsina inactivat și kalikreina (39krys) - Seria 4 - experimental în care degidrogenazneyrotsitov activitate studiat prin injectarea intraperitoneală de tripsină activă și kalikreina, precum activitatea dehidrogenazelor și a conținutului de glicogen în neytrofilnyhleykotsitah șobolani prin injectarea intraperitoneală a aktivnyhfermentov de testare (24 animale). Medicamentele testate au fost administrate la rascheta50 micrograme per 100 grame de greutate animală. Studiul șobolanilor metabolic nervnyhkletok cortexul leucocite neutrofilice osuschestvlyalispustya 6 ore după administrarea intraperitoneală a experimentelor de testare preparatov.Rezultaty sunt prezentate în tabelele N1 și N2.

Când obiectul de studiu histochimic izucheniyasluzhil secțiune creier de șobolan, luate în girusul peredneytsentralnoy rămase. Pentru analize histochimice au preparat kriostatnyesrezy 15 microni grosime la -20^oC în mikrotome- kriostateMK-25 prin metoda uzuală [9]. Celulele cortex cerebral mozgakrys lactat a fost detectată activitatea dehidrogenazei, procedura glitserofosfatdegidrogenazypo Hess, Scarpelli, Pierce [9] și suktsinatdegidrogenazypo Procedura Nahlasa [8]. Activitatea dehidrogenaze judecat granule formazan pokontsentratsii în secțiuni ale obiectelor. Kontrolspetsifichnosti degidrogenazprovodili detectare histochimică a activității pe secțiuni criostat de tesut cerebral care inkubirovaliv soluții de lucru în absența substratovokisleniya specific în acesta. Contabilizarea reacția histochimic folosind dehidrogenaza osuschestvlyalis cytophotometry la o lungime de undă de 512 nm, zonda0,1 cm diametru, lentila 40 [1]. Evaluarea reacțiilor pur chimice otsenivaliv unități de absorbanță. La determinarea activității granulocitelor neutrofilice degidrogenazv șobolani albi sânge explorat aktivnostSDG [15], LDH și pentru metoda TPD Hess și colab. [8] modificare propusă Borisova MA și colab. [3,4]. vyyavlenieglikogena citochimic în leucocite neutrofilice a fost realizată prin metoda Hotchkiss-Shabadash [11,13]. Final reacție estimare citochimic osuschestvlyalipo principiu Kaplow L. [14]. leucocite polimorfonucleare în grad zavisimostiot activității enzimatice a fost clasificată:
1 grad - în citoplasmă granule individuale conținute formazana.Aktivnost enzimă neglijabilă (figura 1a).
2 grade - granule formazan ocupă mai puțin de jumătate tsitoplazmykletok. Acest grup include celule care conțin mici (pulberi) include sau masa difuză colorată foarte pal (1b).
3 grade - au exprimat incluziuni leucocitelor cu produsele de reacție, care ocupă mai mult de jumătate din citoplasmă neutrofile (1C).
4 grade - exprimate celule cu produse incluziuni de reacție ocupă întreaga citoplasmă leucocitele neutrofile. Aktivnostfermenta mare (ris.1g). Rezultatele cercetării statisticilor de variație obrabatyvalimetodami.

Rezultate și discuții.

injectarea intraperitoneală a șobolanilor a provocat o creștere a ilikallikreina tripsina în neurocitelor și celule neyrogliibolshih emisferelor cerebrale activitatea enzimei aerobnogookisleniya - LDH 27,2% (p < 0,001), на 18,2% (р < 0,002)соответственно. Активность ЛДГ в изучаемых клетках больших полушарийголовного мозга под действием трипсина и калликреина снизиласьна 27,8% (p < 0,025) и на 16,3 (р < 0,001) соответственно.Активность ГФД в нейроцитах и клетках нейроглии больших полушарийголовного мозга снизилась на 26,0% (р < 0,01) только под действиемтрипсина. Введение калликреина также вызвало уменьшение данногоцитохимического показателя на 5,3% (р < 0,05).

Rezultatele studiului sunt prezentate în Tabelul obobschenyi. N1.
Efectul tripsinei și kalikreina asupra activității dehidrogenazei, neuroglia sistemeneyrotsit cortexul cerebral al șobolanilor in vivo (M +/- m).

Notă: numărătorul - Activitate degidrogenazv unități uzuale condiționate la numitor - modificarea indicelui în raport cu protsentahpo de control. Pentru o serie de experimente N3,4 - Controlul yavlyaetsyaseriya N2. Seria N5- N3. Pentru o serie de N6 - seria N4. (*) - p < 0,05- (**) - р < 0,025- (***) - р < 0,01- (****)- р < 0,002- (*****) - р < 0,01.

Data-Compararea activității parabolic issledovaniyameta histochimice celulelor creierului si belyhkrys sanguine studiate acțiunea proteazelor identificate acelorași indicatori napravlennostizuchaemyh. Administrarea parenterala tripsinai animale Kalicreina într-o doză de 50 mg per 100 g greutate corporală cauzat sistemului suschestvennyysdvig metabolismului și neuron-neuroglia și scoarța golovnogomozga și neutrofile față crescut vosstanovitelnyhprotsessov oxidarea aerobă, după cum reiese în mod clar de creșterea aktivnostiSDG, o enzima cheie in fosforilării oxidative. Uchityvayapryamoe kininogenaznoe acțiunea tripsinei din sânge și kalikreina [12], putem presupune că am identificat celulele izmeneniyav citochimice ale cortexului emisferelor cerebrale ale acțiunii obuslovlenybiologicheskim șobolan de kininele, care pronikayutcherez probabil bariera hematoencefalică și stimulează în procesele tkaniaerobnye redox neuronale.

scăderea activității LDH, o enzimă cheie aerobnogookislitelnogo enzimă în celulele creierului și sânge belyhkrys prin acțiunea tripsinei sugerează că această administrare parenterală fermentpri inhibă glicoliza în celule cu razlichnoyfunktsionalnoy specificitate.

Este cunoscut faptul că în comparație cu cele mai multe organism drugihkletok în toate leucocitele prevraschenieuglevodov glicolitic prevalează asupra fosforilării oxidative. Udelnyyves glicoliză este mai mult de 60% din totalul energeticheskihprotsessov [10].

Tabelul 2.
Modificările activității dehidrogenazei și conținutul de glicogen din neytrofilnyhleykotsitah șobolani albi sub acțiunea tripsinei și kalikreina (M +/- m) - (în unități de activitate Kaplow)

Notă: în fiecare issledovaniyi serie utilizată în controlul 6 animale. Semnificația diferențelor: p < 0,001.

1. Administrarea parenterală de doze mici de horoshoizuchennymi tripsina, împreună cu proprietăți terapeutice, inhibă energeticheskiyobmen anaerobe neutrofile inhibă procesul de migrare a leucocitelor ochagvospaleniya și previne astfel vospalitelnogoprotsessa răspândit.
2. Efectul dozelor mici de tripsina crește antitripticheskuyu aktivnostgomogenata emisferelor cerebrale de șobolan și are efect antiinflamator vyrazhennyylechebny.
3. kalikreina doze mici, ca doze mici de LDH tripsina snizhayutaktivnost si TPD in leucocite neutrofile si creier omogenatul stimuliruyutantitripsinoliticheskuyu mozgakrys activitate care permite kalikreina în doze mici, precum și tripsina, utilizat ca un agent antiinflamator.

Referințe

1. Agroskin LS Papayan GV Cytophotometry: echipamente si metodyanaliza celulelor de absorbție a luminii. - Leningrad. Știință, 1979.- 259 p.
2. Baumhakl U. S. Fodemar, enzima Kreychova H. ostryhi procese inflamatorii cronice în cartea: terapia enzimatică sistemică: cercetarea și practica clinică. Editat K.Nouza, ZA. Masinovsky, R. Nouza. - Munchen. - Praga. - 1994. - S. 27-30.
3. Borisova MA, Ovcharenko NI, spa-uri AS Unele supravitalnyesposoby Determinarea citochimic a activității succinat dehidrogenazei laktatdegidrogenazyi sanguin celulelor // Lab. de afaceri. - 1975.- N 12. - S. 723-725.
4. Borisova MA, Ovcharenko NI Shpak SI, și colab. Supravitalnyesposoby citochimic determinarea activității alfa-glitserofosfatdegidrogenazyi glucoză-6-fosfat dehidrogenază în leucocitele perifericheskoykrovi // Lab. de afaceri. - 1983. - N 9. - pp 8-10.
5. VF Veselov, VA Protsenko Efectul enzimelor proteolitice uux inhibitorii asupra absorbției țesutului cerebral de oxigen al șobolanilor și activitate eeantitripticheskuyu // Ukr. Biochem. Zh. - 1981. 4. N - pp 106-108.
6. Wolf, M., enzime K. Tratamentul Ransberg. - Moscova: Mir, 1976.- 233 p.
7. Dittmar DF Anexita în carte: terapie sistemică enzimă: practica clinică Studiile-niyai. Editat de K. Nouza, ZA. Masinovsky, P. Nouza. - Munchen. - Praga. - 1994. - S. 35-36.
8. E. Pierce Histochemistry teoretică și aplicată. Moscova: Inostr.liter, 1962.- 962 p ..
9. Fedorov NA hematopoieza normală și reglementarea acestuia. - Moscova: Medicina, 1976. - 543 p.
10. Shabadash AL Mecanisme citologice și citochimice bariera predstavleniyao in celule. Lucrările reuniunii în cartea: histo-gematicheskiebarery. - Moscova: Nauka, 1961. - P. 381-394.
11. Influențe Hamberg U. pe sistemul kinin proteolizei inplasma // Proc. Roy. Sol. - London, 1969. - V. 173. - P. 393-406 N 1032.-.
12. Hotchkiss R.D. O reacție microchimice resalting în structurile polizaharidice staimingof în preparate yissue fixe // Arch. Biochem. - 1948. - V.16. - P. 131-141.
13. Kaplow L. O procedură histochimice pentru localizarea unei activități phasphatase evacuatingleucocyte în frotiurile alcalină a sângelui măduvă // Sânge. - 1955. - V.10. - P. 1023-1029.
14. Klashka F. orale - noi enzime abordare a cfncer tritment // Forum. - Med. - Verl. - Ges. - 1996. -V.2.- R. 102.
15. Quglino D., fixarea Hayhol F. Acetona pentru cytochemicaldemonstration de dehidrogenase în sânge și măduvă osoasă ctlls // Nature.- 1960. -V.1.- P. 85-86.
16. Sokolova A. Behandlung des multiplen myeloms mit enzimen // Wzarba Y., Klein M.-W., Miehlke și colab. (Eds.). Sistemischeenzymtherapie. Aktueller stea și Fortschritte. - MMW MedizinVerlag. - Munchen. - Germania. - 1996.