Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.

UtverzhdenyGlavnym gosudarstvennymsanitarnym vrachomRossiyskoy Federația -Primul zamestitelemMinistra zdravoohraneniyaRossiyskoy FederatsiiG.G.ONISchENKO9 ianuarie 1998 godaData introducere - 08 iunie 1998 goda4.2. METODE DE CONTROL. Diagnosticul biologic microbiologică a difteriei FAKTORYLABORATORNAYA INFEKTSIIMETODICHESKIE UKAZANIYAMU 4.2.698-981. Ofițerii Federal de referință proiectat - difterie laboratoriidiagnostiki infektsiiMoskovskogonauchno Institutul de Cercetare de Epidemiologie si Microbiologie im.G.N. Gabrichevskogo (MD Mazurova IK, MD Melnikov k.b.n. Kombarova S., O. Borisova) și DepartamentomGossanepidnadzora Ministerul rus al Sănătății (Žilina NY .2). Aprobat și pus în aplicare un medic important gosudarstvennymsanitarnym al Federației Ruse, prima zamestitelemMinistra sănătate a Federației Ruse din 08 aprilie 1998 D.3. VvedenyvzamenMetodicheskihukazaniy4.2.589-96"Diagnosticul de laborator al infecției difterice".1. orientări Zona primeneniyaMetodicheskie elaborate pentru a ajuta laboratoarele spetsialistambakteriologicheskih sanitare - epidemiologichoskoysluzhby, sănătate - instituții de îngrijire și științifice Institutul de Cercetare pentru a îmbunătăți infektsii.2 difterie laboratornoydiagnostiki. Caracteristicile agentului cauzal al difteriei infektsiiVozbuditelem difteriynoyinfektsiiyavlyayutsya toksigennyeCorynebacterium diphtheriae. Nontoxigenic Corynebacterium diphtheriae difteriine cauza infecției. "etiologic" semnificație etihmikroorganizmov în cazul bolilor infecțioase (faringite, artrita, endocardita, etc.) necesită o dovadă specială. Atunci când vydeleniinetoksigennyh tulpini de C. diphtheriae de la pacienți cu infecție nadifteriynuyu suspectate ar trebui să acorde o atenție la pravilnostprovedeniya examen bacteriologic și evaluare pe baza capacității toksigennyhsvoystv.V fagul C. diphtheriae produc fenomen ekzotoksinlezhit (sau lysogenic) conversia. tulpinile Konversiyanetoksigennyh C. diphtheriae în naoborotvosproizvoditsya toxigenic și numai în condiții specifice, experimentale. În tehsluchayah când în timpul insamantarea inițiale a materialului difterie otbolnyh toxigenic izolate, iar la povtornyhobsledovaniyah după tratamentul cu antibiotice - difterie netoksigennyekorinebakterii, se poate presupune că, atunci când ispolzovaniiantibiotikov dispar în principal tulpinile toxigene kakbolee sensibile la acțiunea lor și shtammyprodolzhayut nontoxigenic alocate. Aceeași situație poate fi creată și purtători antibiotice prisanatsii bacterii, și, în același timp, vydelyayuschihtoksigennye nontoxigenic difterie Corynebacterium. media Detectarea Utaka în studii repetate numai netoksigennyhshtammov nu poate fi interpretată ca o pierdere a capacității shtammovprodutsirovat ekzotoksin.Taksonomicheski aproape vedere C. diphtheriae sunt C.ulceransi C.pseudotuberculosis (C.ovis). Aceste microorganisme - bovine prirodnyepatogeny și vite mici, cai. Otmechenasposobnost aceste tipuri de bacterii produc o toxina podobnyydifteriynomu. Există, de asemenea "nontoxigenic" tulpini. alocarea Izvestnysluchai "toxigen" C.ulcerans în kartinezabolevaniya clinice similare difteriey.Na membranelor mucoase orofaringian ale nasului și normale chastovstrechaetsyalozhnodifteriynayapalochka Hoffmann (C.pseudodiphtheriticum). Capacitatea de a izola și identifitsirovatdannye bacterii servește drept criteriu în evaluarea rabotybakteriologov calității microorganismelor period.Vse interepidemic balansierelor din genul Corynebacterium yavlyayutsyagrampolozhitelnymi, care nu formează spori gradul de obladayuschimirazlichnoy polimorfism. Cele mai multe specii cresc mai bine colonii vaerobnyh usloviyah.Obychno de microorganisme din genul Corynebacterium naplotnyh mediu nutritiv (de exemplu, pe agar cu sânge) imeyutserovato - alb sau gălbui, ilipoluprozrachnye opace, de formă rotundă, cu un diametru de 1 - 3 mm. Cel mai adesea onibyvayut moale, consistență untoasă, cu toate că unele specii rodakorinebakteriimogutobrazovyvat dur R-kolonii.Predstaviteli de acest tip nu au un fermentativnoyaktivnostyu de mare. C.diphtheriae cresc la 37sh C, rezistent la nizkoytemperature sensibile la ridicat. Toate dezin veschestvav concentrațiile convenționale (3 - 5%), korinebakteriidifterii distruse în termen de 20 - 30 de minute. Toxigenic boleechuvstvitelny C.diphtheriae la antibiotice decât nontoxigenic. Vozmozhnopoyavlenie tulpini rezistente la antibiotice. Larg opredelyatchuvstvitelnostkantibiotikam izolate otbakterionositeley nu ar trebui să fie din cauza unui eșantion nepotrivire de rezultatovlaboratornoy la actiunea antibioticelor asupra organismului vozbuditelyadifterii cheloveka.Dlya C.diphtheriae caracterizat polimorfism dimensiune -raznoobrazie semnificativă și forma de celule. Celulele au forma de cluburi, racquets etc. estru interpunere celula amintește rimskietsifry X, V. Atunci când culoarea este adesea găsit vyrazhennayavnutrikletochnaya striere, datorită prezenței zerenvolyutina. Descrisă afinitate volutin la albastru de metilen și acele granule de colorant priobrabotke sau benzi (clustere de granule), albastru pata de culoare, iar în unele protoplasme sluchayahmozhet dobândi rozovyyottenok.Ispolzovanievbakteriologicheskoy practica okraskipoGramuyavlyaetsyanetselesoobraznym sau chiar poskolkukletkiC.diphtheriaelegkoobestsvechivayutsya spirtomimogutvyglyadetvmazkegramvariabelnymi gramotritsatelnymi.Dlya C.ulcerans și C .pseudodiphtheriticum sklonnostk caracterizate printr-un aranjament paralel de celule. 24 - 48 de ore de cultură etihvidov sunt adesea ovoid forma formă kletok.Po colonii și unele svoystvamC.diphtheriae biochimice impartite in punct de vedere cultural - biohimicheskievarianty - gravis, mitis, intermedius.Cherez 48 - 72 de ore de creștere variantă mitis formează tip koloniiS - neted, un diametru de 1 - colonii convexe 2 mm-variant SR-gravisobychno cu un centru de ridicat, cu un diametru de 2 - 3 colonii mm varianta intermedius - S-tip,, plat, neted, razed diametru mic margine 0.5-1 mm. Următoarele descrie doar dvakulturalno - realizare biochimice - gravis și mitis, deci kakbiovar svoystvamne rare și biochimice intermedius diferă de biovar mitis.Na media telluritovyh sânge după 48 de ore de creștere koloniiC.diphtheriae realizare gravis, precum colonie C.ulcerans, negru mat au o striuri radiale. KoloniiC.pseudodiphtheriticum au o lumină caracteristică obodok.V bakteriologicheskoypraktikeopiratsyatolko proprietăți namorfologicheskie colonii sau celule microbiene priidentifikatsii C.diphtheriae, nu este posibil. hipo- bacteriologic Opisanysluchai și hyperdiagnostics (55% și 14,5%, respectiv) atunci când sunt utilizate uchettolkomorfologicheskih semne. Atunci când se identifică C.diphtheriaeneobhodimo complex utilizat testul principal patogenitate (toxigenicitatea) principalele proprietăți toxigene priznakavozbuditelya difterii.Opredelenie efectuate bacteriologists în prima zi a coloniilor suspecte de creștere pe plăci pervichnogoposeva materiale. Pentru a evita erorile în bacteriile corineforme determinarea toksigennyhsvoystv, este necesar să se studieze această indicație umaksimalnogo număr de colonii din plăcile tehnicilor primare de conformitate poseva.Pri descrise mai jos pot fi studiate toksigennostbolee peste 20 de colonii suspecte dintr-o singură analiză. Material Nelzyaizuchat la creștere plural koloniytolko suspecte un-doi activitatea blyashkah.Fermentativnaya microorganismelor studiate putemopredeleniya tsistinazy enzimă, ureazei, capacitatea de a cliva dokisloty glucoză, zaharoză, amidon. In cazuri rare, identifica kogdaneobhodimo C.ulcerans, adăugat azotat navosstanovlenie testul nitrity.Uchityvaya că atunci când difteriynoyinfektsii identificarea agentului patogen elementul principal este determinarea prezenței de toxină otsenkidrugihsvoystvimeet znachenie.Ispolzovanie auxiliar "lung" carbohidrat este numărul de C.diphtheriae.Prakticheskimbakteriologam priidentifikatsiya redundant angajate în diagnosticul de laborator al difteriei, nu trebuetsyaprovodit identificarea speciilor altor microorganisme rodaCorynebacterium. În același timp, în laborator, în cazul în care provoditsyadiagnostika boli cauzate "nedifteriynymi"Corynebacterium, utilizarea insuficientă chiar "lung"rând de carbohidrați. Pentru datele de identificare precise mikroorganizmovneobhodimo folosesc metode de cercetare chemotaxonomice, cum ar fi detectarea prezenței acizilor mycolic, peretele celular al bacteriilor și unele vsostave mod drugie.Takim microorganism este selectat vozbuditelemdifterii dacă are proprietăți toxigene opredelennymspektrom activitatea enzimatică (clivarea glucoză, amidon, absența descompunerii zaharozei enzimă prezență tsistinazy, absența fermentaureazy) și -kult morfologice caracteristice semne uralnymi (formarea de colonii pe krovyano negru sau serogotsveta - medii telluritovyh adaptate, prineobhodimosti, morfologie celulară - polimorfa sporpalochki nu formează) .3. IssledovanieBakteriologicheskoe studii bacteriologice au fost efectuate pentru a laboratornoydiagnostiki infecție difterie, identifica sursele de infecție pentru prevalența toxigen inablyudeniya korinebakteriidifterii.VZYaTIE SI MATERIALA1 LIVRARE. Succesul examenului bacteriologic în znachitelnoystepeni depinde de captare de timp și corectă a materiala.2. Luând materiale trebuie în mod specific lucrătorilor obuchennyemeditsinskie de sănătate - de îngrijire uchrezhdeniy.3. In studiu pentru a examina orofaringelui și difteriei nos.Pri difteriei Localizările rare (ochi, urechi, rana, piele, vagin), în afară de leziuni ar trebui sa ia, de asemenea, materialul din smindalin nosa.4. Luând materialul se efectuează folosind tampoane sterile vatnyhsuhih. Pentru prepararea lor, folosind un ilimetallicheskie de lemn (din oțel inoxidabil) tije, unul dintre kontsovkotoryh bine rana strat de bumbac absorbant (primerno120 mg tampon de bumbac). Tampoanele trebuie să fie în formă "picături"şi nu"ax". Tampoanele sunt montate într-un tub de testare cu pluta sau vatnymiprobkami, astfel încât la sfârșitul tamponul nu atinge partea de jos și stenokprobirki. Steriliza tampoanele într-un cuptor cu aer fierbinte la temperature140sh C timp de o oră sau prin autoclavare la 0,5 atm. 30 min.5. Materialul din orofaringe și nazale tampoane care iau stomacul gol individuale sau nu mai devreme de două ore după masă, atunci când horoshemosveschenii, cu ajutorul unei spatule, fără a atinge limbajul tampon suprafețele ivnutrennih ale obrajilor si a dintilor. Un tampon sobirayutmaterial cu leziuni ale orofaringelui - amigdalele si prineobhodimosti - cu arcade ale palatului moale, uvula sau faringelui zadneystenki. În prezența plăcii, materialul trebuie luat sgranitsy țesutul bolnav și sănătos, apăsând ușor pe nihtamponom. Pentru a lua materialul din nas folosind un alt tampon, care este introdus mai întâi într-una și apoi în cealaltă nară, nekasayas snaruzhi.6 nări. Când materialul laryngoscopy (film slime) sobirayutneposredstvenno laringelui. Material cu leziuni kozhisleduet colecta tampon uscat după îndepărtarea crustelor sau strupa.7. Tampoanele au bytdostavleny în laboratoriyunepozdnee 3 ore de la administrarea materialului. Când provedeniiobsledovaniya Contingentele în zone îndepărtate bakteriologicheskihlaboratory, este recomandat să planteze material asupra mediului cupa spitatelnoy sau utilizați sredu.8 de transport. În cazul transportului de material mediu tampon sobirayutsuhim muiată în eprubetă cu mediul și să se asigure că fișa nu este tampon umed. Rețineți că mediul primenenietransportnoy se extinde emiterea de otvetana finală o sutki.9. Cup (sau un tub de testare cu un mediu de transport) cu material posevomissleduemogo pot fi plasate pentru creșterea vtermostat la 37sh C timp de 15 - 18 ore, după care se livrează vlaboratoriyu.10. În timpul transportului pe distanțe lungi ca tampoanele mozhnoispolzovat presaturate rastvoromglitserina. Tamponul impregnat cu soluție apoasă 5 procente de apă glicerină vdistillirovannoy scurs pe peretele vasului cu soluția, spori in vitro precum și tampon uscat și autoclavizat pri0,5 atm. 30 Min.11. Material de testare sezonul rece este livrat în saci de vbaklaboratoriyu - termos, pentru a preveni zamerzaniya.12. Vsluchaeneobhodimosti Corynebacterium diphteriae în materialul postmortalnyhissledovany tselesoobraznobrat cu amigdaliene, laringe și cavitatea nazală ca în vnutrennihorganah redko.13 patogen detectat. Fiecare tub cu materialul de testat (faringe, nas ilidrugaya localizare) este atașat la numărul. Numărul tub atașat spiskeukazyvaetsya, numele, prenumele (sau inițialele), vârsta, numele instituției, materialul de ghidare sau adresobsleduemogo acasă, scopul studiului (cu ukazaniemdiagnoza de diagnostic, pe baza indicațiilor epidemiologice, de îngrijire preventivă), data a lua materiala.HOD de cercetare. PRIMA DENPosev materiala.Material pentru investigarea orofaringe, nazală sau drugihporazhennyh locuri însămânțate separat pe suprafața unei medii de nutrienți dens izrekomenduemyh, turnat în cupe Petri.Posev de la o față pentru a produce o ceașcă folosind jumătate prietom suprafața unui material izrotoglotki mediu de însămânțare, și un al doilea - pentru materialul de cultură din nas. Când posevemateriala din piele sau alte locuri de a adăuga o altă ceașcă. NU material de cultură admisă de câteva persoane pe material săditor chashku.Pri este frecat în mediul din toate părțile tampon nauchastke suprafață de 2 x 1 mp. cm - formarea unei astfel "loc de joacă"Este o necesitate. Apoi, același tampon cu inoculează ostavshuyusyapoverhnost 1/2 cană. Însămânțarea produc neperekryvayuschimisyashtrihami frecvent fără a scoate tamponul de pe suprafața mediului nutritiv și poziția invariabilă tamponul. Această metodă permite zaseyatves materialului de însămânțare cu tamponul pentru a obține colonii izolate (chistuyukulturu) pentru identificarea ulterioară a semănat direct pe chashkepervichnogo care scurtează testul odnisutki. Plăcile inoculate sau tuburile care conțin transportul termostat pomeschayutv mediu la 37sh C. Însămânțarea de mediu de transport pentru a produce mosteneasca zi dens tampon mediu ostenki presat tuburi sau bucle, luând materialul din osadka.Posev trebuie realizată pe plăci cu mediul, temperatura sau prikomnatnoy încălzit într-un incubator (15 - 20 de minute) .VTOROY day1. Coloniile cultivate pe plăci de 24 prin chasaposle browsing materialul de însămânțare (dacă materialul este placat în al doilea polovinednya, vizualizarea se face în exact 24 de ore, adică, de asemenea, a doua jumătate a zilei), fie vizual, fie folosind mikroskopabinokulyarnogo stereoscopică (MBS) .2. Cupe cu coloniile, cum ar fi difterie, luate dlyadalneyshey identificarea culturii în toate testele. Mikroskopiipreparatov - tampoane "suspect" Coloniile pot fi neconductiv. "suspect" colonie krovyano - telluritovyhsredah după 24 de ore de lumină creștere - gri, convexe, margini rase, în 48 de ore - gri, cu o tentă metalică, srovnymiili marginile ușor zimțate, sfărâmare de buclă priprikosnovenii sau o consistență moale. din "dubios"Coloniile sunt preparatele preparate - mazki.Kletki Corynebacterium diphtheriae dintr-o cultură crescută pe inhibitori de creștere sredahs (telurit de potasiu, hinozol) pot bytukorocheny, îngroșată, dar locația lor inerentă și polimorfizmsohranyayutsya. Evaluarea trăsăturilor morfologice nu pozvolyaetustanovit specii de un microorganism, dar ar trebui să-l ia daetvozmozhnost la genul microscopie korinebakteriy.Esli arata coli rodakorinebaktery caracteristic, aceste colonii sunt selectate pentru dalneysheyidentifikatsii în toate testele. In cazul altor formmikroorganizmov (coci, drojdie, tije de spori), aceste colonii dalneysheeizuchenie prekraschaetsya.3. În cazul creșterii "suspect" colonii similare ar trebui să înceapă imediat studiul proprietăților lor toxigene studiu svoystv.Toksigennye nu mai puțin de 2 izolirovannyhkolony prin plantarea unei jumătăți din fiecare din coloniile de pe toxicitatea se dlyaopredeleniya mediu și bucla unfired, - la mediu Pisa și cealaltă jumătate a coloniilor - în tub cu syvorotochnymagarom teșite pentru conservarea și acumularea de cultură. Când nevozmozhnostisnyat 1/2 colonii pentru însămânțare de pe toxigenicitatea și la materialul Pizuispolzuetsya mediu kolonii- cultură întreaga pe agarisklyuchaetsya teșite și, în continuare, din tuburile de cultură folosite sproboy Pisa. Având în vedere că, după 24 de ore de creștere a dimensiunilor și a materialului de colonii imeyutnebolshie 1/2 sau 1 colonii pot bytnedostatochno pentru acumularea de toxina difterica într-o natoksigennost probă, și că, în materialul mogutnahoditsya simultan toxigenic și difteriei raznovidnostikorinebaktery nontoxigenic, este esențial să se examineze toksigennyesvoystva de posibil, la numărul maxim de colonii (mai mult de 20), amestecarea timp de 5 - 7, similar cu colonii unul blyashku.4. Dacă este imposibil să eșantion setarea toksigennostklassicheskim metodei (vezi. P. 3) din cauza velichinykolony insuficiente, studiul lor, amestecarea de același tip de colonii neskolkihblyashkah. Nu arde prin bucla, inoculate miercuri Pisa. Cupele spervichnym semănat materialul testat a fost plasat din nou vtermostat timp de 24 de ore și navigarea-le din nou (prin tretisutki) .5. Dacă numai o singură colonie crește, ea poate fi semănate nasredu pentru determinarea toxigenicitate și fără ardere în buclă la stolbiksredy Pisa pentru a determina tsistinazy. Identifikatsiimozhno pentru utilizarea ulterioară a tubului de cultură cu proba sau cu Pisa blyashkicherez 48 de ore de creștere, sau 24 de ore de creștere la proprietăți vyyavlennyhtoksigennyh kultury.6. Pentru a elibera un răspuns preliminar coloniilor suspecte de creștere sluchaemnozhestvennogo pot proizvestiposev mai multe colonii în Phragmites dlyapostanovki mediu lichid, Sachse umple probă suplimentară (3 -5 colonii similare păstrând după 30 min de incubare). Și proba Pisa (5 - 6 colonii similare , reprezentând prin 3 ore de incubare). Priharakternoy pentru Corynebacterium difterie în MBS colonie morfologia, morfologia celulelor prin microscopie, proba negativ Sachse, un eșantion de rezultate pozitive Pisa, Phragmites poate vydatpredvaritelny răspuns la detectarea culturii difteriei nakorinebakterii suspecte după 48 de ore (a treia zi) cu momentapervichnogo însămânțarea investigate materiala.TRETY day1. După 24 de ore, atunci când un liniypretsipitatsii specific pe un suport pentru determinarea toxigenității, polozhitelnoyprobe pe tsistinazu, au studiat cultura identificat kakkorinebaktery difteric toxigenic și absența dokumentirovannyyotvet.Pri a scoate linii specifice de pe toxigenității dlyaopredeleniya de precipitare medie, plăcile au fost incubate pentru încă 24 chasa.2. Cultura crescută pe agar înclinat sau ser sproby Pisa (după evaluarea purității sale) sunt însămânțate în mediul dlyaopredeleniya variantă biochimice (zaharoză, glucoză, amidon) ifermenta ureazei (hidroliza ureei) .3. Plăcile cu inocularea primar issleduemogomaterialaprosmatrivayut vizual sau prin re-MBS 36 -48 oră de incubare într-un incubator. În prezența "suspect"Coloniile studia activitatea proprietăților lor toxigene tsistinaznuyu ivydelyayut cultură pură pe skoshennyysyvorotochny agar (cm. A doua zi a studiului, p. 3) .Dacă nici colonii suspectate korinebakteriidifterii, da răspuns final că Corynebacterium difteriine vyyavleny.Pri nici o creștere la însămânțare inițială agar ore cherez48 de incubare, în unele cazuri, necesită luarea repetată de material iissledovanie. Absența completă a creșterii vsegosvidetelstvuetonarusheniipravilbakteriologicheskogoobsledovaniya adesea (luarea de livrare, materiale și kultivirovaniyaissleduemogo plantare) .CHETVERTY zi (sau a cincea) 1. Atunci când liniile specifice de mediu toxigenicitatea dlyaopredeleniya de precipitare (24 de ore de incubare, probele natoksigennost 48 Creșterea oră de primar semănat) polozhitelnoyprobe pentru a da tsistinazu documentate răspuns vydeleniitoksigennyh difterii.2 corinebacterii. Cultura crescută pe agar înclinat sau ser sproby Pisa, după determinarea purității sale, se inoculează pe mediul dlyaizucheniya proprietăți biochimice (mediul Hiss cu zaharoză, glucoză, amidon, proba Sachse cu uree sau bulion) .3. Din nou (după 48 de ore) ia în considerare rezultatele natoksigennost eșantionului prezentat în timpul Ziua 2 a studiului. Odnovremennoproizvodyat proprietăți saccarolitic păstrare și vprobah activitatea ureazei stabilite la 3 zile absenta issledovaniya.Pri linii specifice 48 probe de precipitare chasovposle stadializare la toxigenicitatea dar polozhitelnyhrezultatah probe pentru tsistinazu, glucoza, ureazei rezultatahprob negativ și zaharoză, cultură identificate kakkorinebakterii difterie nontoxigenic, indicând izolarea biohimicheskogovarianta.Pri de toxigenic Corynebacterium difteriidopolnitelno da un răspuns despre biochimice Propr tvah (ili96 72 ore după însămânțare inițială a materialului) .BAKTERIOLOGICHESKOE ZAKLYUCHENIE1. Prezența liniilor de precipitare specifice cu opredeleniitoksigennyhsvoystv, test pozitiv pentru tsistinazu, test negativ pentru ureazei, cultura ibiohimicheskie proprietăți caracteristice (zaharoză, glucoză, amidon) pozvolyayutzaklyuchit care se referă la culturi izolate minte korinebakteriydifterii toxigenic realizare, biochimice sau mitis.2 gravis. Absența unor linii specifice cu opredeleniitoksigennyhsvoystv de precipitare, test pozitiv pentru tsistinazu, test negativ pentru ureazei, ibiohimichekie cultură proprietăți caracteristice ne permit să tragem concluzia că kulturaotnositsya izolată la speciile difterie Corynebacterium, nontoxigenic realizare, biochimice sau mitis.3 gravis. În prezența liniilor de precipitare cu tulpina identice de control spetsificheskimliniyam Corynebacterium diphtheriae, ureazice polozhitelnyhprob, tsistinazu, glucoză și amidon de fermentație, absența fermentației zaharoză vnitrity nici o reducere a nitraților, cultura apartine ultserans corineforme minte variant.Pri linii fără precipitare toxigene la determinarea toksigennyhsvoystv și aveti toate celelalte caracteristici ultserans dlyakorinebaktery caracteristice, opțiunea nontoxigenic ibakteriologichesky răspuns este considerat negativ ym.4. Când selectați Corynebacterium Gofmanailidrugihdifteroidov, ca răspuns bacteriologică otritsatelnym.5 cred. În unele cazuri, atunci când un examen de diagnostic și poepidpokazaniyam, un răspuns preliminar poate fi dat. Etotrebuet stabilirea de probe suplimentare, prezența mediilor kachestvennyhpitatelnyh, de testare - sisteme de producție și personalul Phragmites spetsialnoobuchennogo. Răspuns provizoriu pot fi emise de creștere multiplă prinalichii similare "suspect" koloniyna vase de însămânțare inițială după 24 ore de incubare (vezi. Studiile vtoroyden, n. 6) Răspunsul .Predvaritelny poate fi modificat după issledovaniya.6 okonchaniyabakteriologicheskogo. Tulpinile de Corynebacterium diphtheriae atipichnymimorfologicheskimi, biochimice, proprietăți toxicogene ultserans ishtammy Corynebacterium ar trebui să fie adresată federalnuyureferens - un laborator pentru diagnosticul infecției difterice priMoskovskom Institutul de Cercetare de Epidemiologie si Microbiologie im.G.N. Gabrichevskogo pentru studii suplimentare (125212 Ul Amiralul Makarov, 10). Schema BACTERIOLOGICĂ studies1 denPosev issleduemogomateriala pe selektivnuyudifferentsialno - diagnostic sau, dacă este necesar, vtransportnuyu mediu. Incubarea într-un incubator la 37sh zi C.2 (24 ore) 1. Coloniile de studiu, dacă este posibil - pe toxigenității postanovkaproby, tsistinazu și agar.2 cultura de însămânțare skoshennyysyvorotochny. Când se utilizează mediul de transport trebuie proizvestiperesev diferential selectiv - sredu.3 diagnostic. Atunci când creșterea multiplă, dacă este necesar, studii mozhnoprovesti pentru emiterea răspunsului preliminar -additional eșantion Pisa, Sachse și cultură "suspect" mediu lichid koloniyv pentru detectarea toxina difterica vRNGA.3 zi (48 ore) 1. Analiza profitabilității probelor pentru toxigenicitate și tsistinazu stabilite în a doua zi a studiului. În cazul în care liniile de precipitare nalichiyaspetsificheskih și o probă pozitivă Pizuvydayutdokumentirovannyyotvet alocare toksigennyhkorinebaktery difterii.2. Însămânțarea cultura pură selectată a doua denissledovaniya, Hiss în mediu pentru a studia proprietățile biochimice (zaharoză, glucoză, amidon, uree) .3. Retrăirea (48 de ore) cupe posevavizualno primar sau folosind MBS. Teste de luptă pentru toxigenității, tsistinazu și screening-ul de colonii pe Serum agar.4 teșite. În cazul mediului de transport, cursul issledovaniyasm. începând cu n. 1 a doua zi și apoi la skheme.5. Vydachabakteriologicheskogootvetaobotsutstviikorinebaktery difterii.6. La setarea RNGA pentru a detecta toxina difterica rezultat pozitiv prinalichii în această reacție și detectare uissleduemoy absența enzimei cultura tsistinazy fermentaureazy poate da un răspuns preliminar pentru a aloca zi vozbuditelyadifterii.4 (72 ore) 1. Contabilizarea cultura proprietăților toxigene selectate în denissledovaniya 3 (după 48 de ore de creștere a insamantarea primare) și răspunsul de alocare vydachadokumentirovannogo toxigenic korinebakteriydifterii. Insamantarea culturi selectate pentru determinarea biohimicheskihsvoystv (zaharoză, glucoză, amidon, uree) .2. Proprietățile de cultură de contabilitate biochimice (ilinetoksigennoy toxigenic) alocate în a doua zi a studiului (ora cherez24 incubare însămânțare inițială) .Vydacha bacteriologic difteria răspuns alocare netoksigennyhkorinebaktery indicând idopolnitelnogo întruchipări răspunsului biochimic al proprietăților biochimice ale toksigennyhkorinebaktery difteriei alocate zi ranee.5 (96 ore) Eliberarea răspunsului alocare bacteriologică (48 însămânțare inițială chasovinkubatsii) sau netoksigennyhkorinebaktery toxigenic difteric y varianta.4 biochimice Azan. Metode de identificare a agentului patogen PROPRIETĂȚILOR difteriynoyinfektsiiOPREDELENIE toxigenic KORINEBAKTERIYDIFTERII FOLOSIND reacție de precipitare într-o metodă bazată pe gel pentru determinarea korinebakteriydifterii toxigenicitatea (testul Elek) constă contra proceselor immunodiffuziitoksina și anticorpii antitoxice într-un mediu nutritiv dens. În loc de corelarea cantitativă optimă între toxina produsă de Corynebacterium și antitoxina nafiltrovalnuyu hârtie acoperită este interacțiunea lor cu obrazovaniempretsipitata ca o linie albă sau "mustață".Toksigennost Corynebacterium diphtheriae determinat, de obicei, în cultură pură (sau cultură de colonii individuale cu skoshennogoagara sau eșantion Pisa). Coloniile amestec sau culturi zagryaznennyepostoronneymikrofloroy pot fi testate natoksigennost. În absența, în acest caz, gelul precipită experiența vagarovom trebuie repetată cu dedicate chistymikulturami.Dlya producții mostre pentru toxigenicitatea trebuie să aibă: un vas Petri sterilă, cu fund plat, un mediu nutritiv - agarMartena sau mediu nutritiv comercial uscat normalnuyusyvorotku de sânge bovine, steril benzi de hârtie izfiltrovalnoy măsurare 1,5 cm x 8 cm, ochischennyyfermentolizom sorbție specific și antitoxina difterică (vdalneyshem denumit antitoxina) protivodifteriynuyuantitoksichesk ser de cal-lea, terapeutic (in dalneyshemimenuetsya ser antitoxic) sau hârtie terminat diskis antitoxina aplicat acestora, și - tulpina difterie Corynebacterium kontrolnyytoksigenny 24 - 48 de ore în cești rosta.Prigotovlenie pentru setarea probyna toksigennostPitatelny agar pentru a determina toxigenicitatea tselesoobraznorazlivat tuburi 10 ml (cantitate necesară dlyaprigotovleniya o cana). Atunci când o cantitate mare de pitatelnyyagar muncă distribuită în flacoane de 70 - 80 ml (7 - 8 proba cești natoksigennost). Agar nutritiv trebuie rasplavlivat tolko1 multiple de topire diferit afectează proprietățile mediului. Pitatelnyyagar rasplavlivayut într-o baie de apă la 90sh C, imediat izbani îndepărtat, răcit la 50sh C și se adaugă bovine 20% ser de krupnogorogatogo. Astfel, până la 10 ml de agar nutritiv a fost adăugat 2 mlsyvorotki bovine, agitat și turnat aseptic într-un vas Petri steril, fundul raspredelyayutsosedu atent centru de rotație chashki.V a cupei la suprafața obozhzhennympintsetom solidifică agar plasat benzi de hârtie de filtru propitannuyuantitoksinom ( sau ser antitoxic) .Chashku uscat într-un cuptor la 37sh C timp de 15 -20 min., rotindu-l cu susul în jos. Când utilizați bumazhnyhindikatornyh conduce o placă de agar nutritiv uscat discuri donaneseniya sredy.Chashki pe suprafața mediului pentru a determina magazin toxigenicitatea nerekomenduetsya.Prigotovlenie hârtie de filtru de hârtie polosokPoloski tăiat într-o dimensiune de 1,5 cm x 8 cm, învelite cu 2 - 4 bucăți într-o pungă și sterilizate în avtoklavepri 0,5 atm timp de 30 minute. Pungi cu poloskamihranyat de hârtie într-un vas Petri sterilă pentru 3 probe de așteptare nedel.Pered la conținutul toxigenicitatea santitoksinom flaconului se dizolvă în 1 ml de fiziologicheskogorastvora steril, transferat într-un tub steril și indică neydannye etichete (dizolvat temperature4 antitoxina stocat la - 6sh C care să nu depășească 10 zile) . Se filtrează obozhzhennympintsetom hârtie plasat într-un vas Petri sterilă. La fiecare antitoxina poloskunanosyat 0,25 ml conținând 500 ME în 1 ml. Dlyaudaleniya exces ser umezit benzi aplicate ceașcă ksterilnoy capac Petri.Pri folosind ser antitoxic (vmestoantitoksina) necesită diluarea acestuia la 500 ME 1 ml.Razvedenie antitoxică syvorotkiSoblyudaya tehnici aseptice, antitoxice fiole de ser perenosyatiz într-un tub steril. Pe tubul indică dannyeetiketki și durata de viață. Se depozitează ser la 4 -6sh C.Syvorotka trebuie diluat cu un conținut steril fiziologicheskimrastvorom la 500 ME în 1 ml. Pregătirea comercială mozhetimet activitate diferită (5000 ME, 10000 ME, 20000 ME) și razlichnyyobem.Naprimer în fiolă conține 10000 ME (într-un volum de 4,8 ml, kakukazano cutie eticheta cu fiole) antitoxică syvorotki.Dlya simplifica calculele, cantitatea totală de ser poate fi ia ml za5. În consecință, în 1 ml de ser conținea 2000 ME (10000 ME: 5 = 2000 ME). Pentru a obține 500 ME în 1 ml sleduet1 ml ser diluat de 4 ori, adică, până la 1 ml de ser dobavit3 ml de ser fiziologic steril. Când neobhodimostimozhno ser diluat în volume mai mici: 0,1 ml syvorotkidobavit la 0,3 ml de soluție salină sau 0,2 ml syvorotkidobavit 0,6 ml soluție salină sau 0,3 ml syvorotkidobavit 0,9 ml de soluție salină și t. ser d.Razvedenie se poate face într-un alt mod. Dacă, de exemplu, conținut într-o fiolă de ser ME 5000 într-un volum de 2,5 ml, ME 500 este conținut în 0,25 ml de ser. La acest volum dobavlyayut0,75 ml de ser fiziologic steril și poluchayutrazvedenie 500 ser ME 1 ser ml.Razvedennuyu pot fi stocate timp de 7 zile la temperature4 - 6sh C.POSTANOVKA PROBYKulturu însămânțate într-un "plăci" diametru .6-.7 cm narasstoyanii 0,7 - 0,8 cm distanță și 0,5 cm de hârtie margine poloskifiltrovalnoy. O ceașcă ar trebui să fie plantate nu mai mult de 10 "plăci". Dintre acestea, 6 "plăci" Cultura de test 4 tulpina -kontrolnogo. Atunci când o cantitate mică de ispytuemogomateriala 6 de control inoculată "plăci" și 4 - subiecții (Figura 1. *>). Cupe cu însămânțare a fost plasat într-un termostat la 37sh C .-------------------------------- *> Nu este privoditsya.Uchet rezultatovRezultat citit de 18 - 24 și 48 de ore rosta.Sleduet trebuie înțeles ser chtopreparatantitoksicheskoyprotivodifteriynoy, în plus față de difteriynomuantitoksinu anticorpi conține anticorpi la antigeni în formularea probei kletki.Poetomu microbiene la toxigenicitatea ispolzovaniemdannogo cu precipitatele de droguri pot fi formate nu numai vrezultate care leagă toxina cu antitoxina (spetsificheskiepretsipitaty), dar, de asemenea, în interacțiunea anticorpilor antibacterieni skomponentami celule Corynebacterii d ifterii (nespetsificheskiepretsipitaty). Acestea din urmă pot fi formate ca un toxigenic, falsifică numărul și tulpina de control, iar la difterie netoksigennyhkorinebaktery. Uneori există apariția de precipitații mnozhestvennyhliny. precipitatelor nespecifici de obicei, ușoare, au apar contururi indistincte cel mult 48 ore, în -72 cazuri rare pot apărea la prima sutki.Kriteriem evalua specificitatea fuziunii precipitatelor este tulpina de testare liniypretsipitatsii cu tulpina toxigenic liniyamikontrolnogo specific. În cazul în care tulpina ukontrolnogo format mai multe linii de precipitare, specifice ar trebui să fie luate în considerare mai precise și poyavlyayuschiesyapretsipitaty devreme. Prin urmare, vizualizarea eșantion ceștile pe toksigennostosuschestvlyayut după 18 - 24 de ore din momentul producerii sale. Dacă vtechenie de data aceasta din linia tulpina pretsipitatsiine de control sunt detectate, aceasta constituie o încălcare a usloviypostanovki reaktsii.Varianty evalua răspunsul rezultatelor: 1. Cultura de testare Corynebacterium diphtheria yavlyayutsyatoksigennymi dacă formează linii de precipitare îmbinare tendință iliimeyut de a fuziona cu controlul spetsificheskimiliniyami shtamma.2 toxigenic relevant. Cultura de testare Corynebacterium diphtheria yavlyayutsyanetoksigennymi dacă: a) linia de precipitare a format cultura de testare, absent prezența liniilor specifice precipitații linie de precipitare ukontrolnogo tulpina b) nu poate fuziona cu tulpina spetsificheskimiliniyami controlul precipitațiilor și încrucișate sau imeyuttendentsiyu încrucișării cu ei (neidentic , nespetsificheskielinii) -c) linii linie de precipitare testul de cultură snespetsificheskimi îmbinare controlul tulpina-d) linia de test precipitare cult Liniile se intersectează și sospetsificheskimi urs unesc cu nespecifice liniyamikontrolnogo shtamma.Ochischenny hidroliză enzimatică și antitoxina sorbție specifică nu conține anticorpi pentru componentele celulelor microbiene. Când ispolzovaniietogo de preparare nu linii nespecifice de precipitare obrazuyutsya.METODIKA toxigenic DETERMINAREA SVOYSTVKORINEBAKTERY CU disc DIFTERIA INDIKATORNYHBUMAZHNYH cu ANTITOKSINOMNa petri suprafață vas cu un mediu pentru microbian plasate indicator difterie opredeleniyatoksigennosti roților sdifteriynym antitoxină. În jurul fiecărui disc de 5 antitoksinomformiruyut "plăci": două "plăci" - o tulpină de control și trei -ispytuemye (o analiză cel puțin două koloniyamiformiruyut suspecte "plăci" din colonii izolate și -din un amestec de 3 - 6 koloniy- imagini similare din aceeași analizamozhno avea loc în jurul celuilalt antitoxina disc). Toate cele cinci"plăci" sunt dispuse simetric în jurul discului de la o distanță de 0,8 smot marginea ei. Diametrul fiecărui "plăci" 0,8 cm. Pe de o ceașcă Petrimozhno găzdui până la patru discuri antitoxinică și, respectiv, 20 "plăci" culturi. Cupe cu posevamipomeschayut într-un termostat la 37sh reacție C.Rezultat citește la 18 - 24 de ore, și 48 ore -Prin. Prezența liniilor de precipitare între santitoksinom disc și testul de cultură arată eetoksigennosti. Studiul a considerat cultura toxice, precipitare această cultură esliliniya fuzionează la un unghi cu tulpina de control linieypretsipitatsii. Lipsa liniilor de precipitare uispytuemyh culturi după 48 de ore, în cazul în care au kontrolnyhshtammov indică faptul că nu au toxigenicitatea izuchaemyhkultur. în linie de precipitare dolzhnypoyavlyatsya tulpini de control după 18 - 24 de ore. Mai târzie liniypretsipitatsii aspect necesită verificarea nutrienților de control al calității mediu ilizameny tulpina de control shtamma.Hranenie în tulpina de control depozitare laboratoriiDlya în laborator mozhnoispolzovat ser semisolid agar nabulone preparat Martin sau alt bulionul nutritiv (pH 7,6). Păstrați vholodilnike replantarea o dată la 2 - 3 luni. Semilichidă agarrazlivayut 8 ml tuburi și 1 ml de bovine syvorotkikrupnogo skota.Kontrolny toksigennyyshtammkorinebaktery difteriei varianta gravis obținută la Institutul de Cercetare de Stat de standardizare ikontrolya preparatovim.L.A medicale și biologice. Tarasevich. În studiul privind toxigenicitate nu poate fi utilizat de control vkachestve, tulpina de producție PW-8 și este necesar să se periodic tulpina varianty.Kontrolny pasate pe krovyanomagare. Pentru identificarea cu succes a corinebacterii difteriikontrolny tulpinii toxigenic subcultivate la fiecare 1 - 2 sutok.METODIKI DEFINIȚII PRIZNAKOVOPREDELENIE TSISTINAZNOY ACTIVITATEA BIOCHIMICE (PROBA Pisa) difterie Corynebacterium și Corynebacterii ultserans, lozhnodifteriynoy unlikefrom Hoffmann și alte tije korineformnyhbaktery posedă buclă cultură enzimă tsistinazoy.Ispytuemuyu inoculată "înțepătură" . In pitatelnuyusredu pentru determinarea tsistinazy, turnat în înălțime probirkistolbikom îngust de 3 cm de compoziție mediu nutritiv are cistina acetic - plumb de acid. In timpul produtsiruettsistinazu cultura de creștere, clivarea tsistin- și format la etomserovodorod reacționat cu acid acetic - plumb acid sulf în kotoryyprevraschaetsya - plumb acid - compus de culoare închisă brun. difterie Corynebacterium și korinebakteriyultserans nu numai provoacă o înnegrire a mediului în timpul injectării, dar nor iobrazuyut întuneric în jurul lui - narasstoyanii brun aproximativ 1 cm de la suprafața medie. Reaktsiiuchityvayut rezultate după 24 ore. În prezența dlyapolucheniya creștere accelerată multiple de răspuns (peste 3 ore), cultura suma inokuliruyutbolshim medie. Simultan ispytuemymikulturami, însămânțarea se efectuează în tulpina de control otdelnuyuprobirku.OPREDELENIE ureazei AKTIVNOSTILozhnodifteriynye Hoffmann coli, ultserans Corynebacterium inekotorye alte microorganisme din genul Corynebacterium pentru a produce obladayutsposobnostyu în timpul creșterii irasscheplyat ureei ureazei enzimă. Corynebacterium diphtheriae astfel capacitatea neobladayut.Probu ureazei pot fi puse în două variante - de metoduZakse (a) și prin placarea pe bulion cu uree (b) .a) Pentru metoda ureazei Sachse porțiunea nepregătit smeshivayut1 de Reactiv A și 19 părți de reactiv B. Amestecul se toarnă în 0,1 ml uzkieprobirki face o buclă și tuburi de test pur înclinate kulturyso agar sau cu mediu Pisa. Pentru răspuns vydachiuskorennogo în prezența creșterii multiple pe placa odnotipnyhkolony însămânțare inițială, coloniile permise vnesenieneskolkih o singură probă tub ureazei. Rezultatuchityvayut după incubare într-un incubator la 37sh C timp de 30 min.b) Cultura pură Corynebacterium diphteriae în smochevinoy inoculat bulion, turnat în eprubete în 2 - 3 ml, și plasat într-un incubator, rezultatul la 24 de ore de incubare la 37sh C.Ferment scindează ureazice uree iuglekisloty pentru a forma amoniac. Acest lucru crește pH-ul mediului și apare indicatorul izmenenietsveta (roseata). În absența acestei issleduemoykultury enzimă, mediu fără colorare proiskhodit.Rekomenduetsya simultan într-un tub separat, zasevatkontrolny shtamm.OPREDELENIE saccarolitic AKTIVNOSTIDlya difterie Corynebacterium identificare takzheotsenku folosesc activitatea saccarolitic a culturilor izolate pentru carbohidrați sredahGissa - zaharoză, glucoză, tub krahmalom.Kazhduyu solubil cu mediu Hiss a fost inoculat cu chistoykultury 1 buclă. Rezultatul la 24 de ore și la semnul otritsatelnomkrahmalnom - se formează acidul, există o restaurare decolorează fucsin și culoarea purpurie sredapriobretaet după 48 ore de cultură culturi vtermostate la 37sh C.Pri fermentarea unui carbohidrat. stavitprobu recomandata simultan cu controlul tulpina Corynebacterium diphtheriae variantagravis.OPREDELENIE nitratreductazei AKTIVNOSTISposobnost Corynebacterium diphtheriae restabili acidul soliazotnoy (nitrat) în săruri acide nitrici (nitriti) este o caracteristică opțională care permite differentsirovatkorinebaktery cultura de semințe de ultserans.Proizvodyat studiate într-un tub de testare cu nitratnymbulonom, incubate timp de 24 de ore la 37sh C.Zatem adăugat 2 - 3 picături de reactiv pentru nitrit (Griess iliKasatkina ). Dacă nu a fost formarea de nitrit, roșu sredaokrashivaetsya. Dacă nu microorganism obladaetnitratreduktazoy, mediu fără decolorare proiskhodit.Odnovremenno cu eprubete, incubate timp kontrolnuyuprobirku sredoy.5 steril. SredyKachestvo medii de cultură nutritive este esențială atunci când studiul lyubombakteriologicheskom. Pentru a realiza difterie Corynebacterium maksimalnoyvysevaemosti materialului de test, aveți nevoie pentru a crea condiții optime de creștere, reproducere conservarea etihbaktery proprietăților lor biologice, precum și dlyaingibirovaniya creșterea microflorei de însoțire. Se dostigaetsyaputem folosesc baze de substanțe nutritive universale cu dobavleniemkrovi și telurit de potasiu. telurit de potasiu în opredelennoykontsentratsii nu inhibă creșterea reprezentanților rodakorinebaktery și aproape complet inhibă mediul de creștere sunt postoronneymikroflory.Krovyanyetelluritovye takzhedifferentsialno - diagnostic ca koloniikorinebaktery pe aceste medii au o culoare gri sau negru (aceste microorganisme sunt capabile de a restabili Telurit dometallicheskogo substanță neagră de potasiu telur și acumularea de celule egovnutri) .NPO "Substante nutritive", Mahacikala suhuyuhinozolnuyu produce diferentiale - diagnostic Miercuri Buchina dlyavydeleniya Corynebacterium diphtheriae, care este preparat prin naetiketke prescripție suplimentată cu% sânge de 5 (nu dobavleniesyvorotki în loc de sânge). Buchina Miercuri, miercuri krovyanymtelluritovym inferioare pentru activitatea inhibitoare și koloniivozbuditelya difterie poate să apară o zi mai târziu decât mediile telluritovyh nakrovyanyh. In ultimii ani, prikladnoymikrobiologii Research Institute (.. regiunea N Obolensk Moscow) pitatelnuyusredu produce izolarea Corynebacterium diphtheriae - korinebakagar.Odnako, comparativ cu mediile telluritovymi de sânge dannoysrede să crească în 2 - 3 ori mai mici colonii korinebakteriydifterii.Uchityvaya de mai sus, totuși, pitatelnymisredami cel mai bun pentru materialul de inoculare primare sunt medii krovyanyetelluritovye. Ca bază pentru aceste mozhnoispolzovat mediu nutritiv uscat agar (SPA) NPO"Substante nutritive" (Mahacikala) pe agar nutritiv osnovepankreaticheskogo hidrolizată, făină de pește (RM) GNIIPM producție (n. Obolensk). Agar nutritiv este preparat prin eticheta rețetă iextempore adăugată sângelui și Telurit kaliya.Dlya determinarea proprietăților toxigene Corynebacterii difteriivypuskaetsya comercial uscat Miercuri OTDM (ONG "Pitatelnyesredy"..., Makhachkala) și GNIIPM (n Obolensk Moscova regiune) date mass-media pregătite de etiketke.Luchshey baza de prescriptie medicala, pe baza pregătirii probelor de mediu și pentru opredeleniyatoksigennosti Pisa rămâne peptonă-vatra deschisă, kotoryygotovitsya în laborator sau în departamentele nutriționale srednekotoryh științifice - de cercetare instituții pentru colonii de abandon prigotovleniyaMartenovskogo agara.Dlya și cultivarea Corynebacterium condiții difteriei vlaboratornyh prepara agar ser ser sredu.Primenenie este pliat netseleso braznym.Kazhdaya nouă serie de mediu de cultură (ambele iprigotovlennoy comercial in vitro) podlezhitbakteriologicheskomu control. În cazurile în care rostovyesvoystva mediu nutritiv nu satisfac predyavlyaemymtrebovaniyam, baze de agar nutritiv bulion preparat nutritiv -suhoy bulion (SPB) fabricat de NPO "Pitatelnyesredy" (Makhachkala), temporizare-bulonproizvodstvaGNIIPM (n Obolensk.) - aminopeptide bulion pentru abatoarele tseleyproizvodstva microbiologice (orașul St. Petersburg, Armavir, Stavropol „) și bulion, preparate în laborator (Hottinger digest, peptonă 1% apei, aminnogoazota conținut 150 -. 180 mg /%) medii de cultură pentru stratul de însămânțare inițială chashkamPetri turnat în 3 - 4 mm. Ele pot fi folosite în zilele techenie3 atunci când este depozitat la o temperatură de pregătire 4SH C.METODY ȘI NUTRIENTILOR MEDIA REAKTIVOVTRANSPORTNAYA media (media ACUMULAREA) ca bază pentru prepararea de transport sredyispolzuyut 0,1% agar nutritiv pe Hottinger digera sau 0,1% agar bulion nutritiv comercial, pH 7,6.0,1% agar bază este turnat în eprubete în autoclavă 4 ml sterilizuyutv la 1 atm timp de 20 minute. Timp de stocare - până la 1 lună la 4SH C. Înainte de utilizare, fiecare tub ssoblyudeniem tehnici aseptice, s-a adăugat 0,5 - 1,0 ml bovine syvorotkikrupnogo și 0,05 ml (1 picătură) 2% rastvoratellurita de potasiu. controlul Selectiv mediul de sterilitate menținând la 37sh C timp de 48 ore. Perioada de valabilitate gotovoysredy - 10 zile la mediu nutritiv 4SH C.ZHIDKAYA pentru DECLARAȚIEI scop RNGAS toxina difterica indicație RNGA materialului chashkipervichnogo însămânțare inoculate într-un tub de testare cu un syvorotochnoypitatelnoy mediu lichid preparat pe bază de bulion Martin, ssoderzhaniem azot aminic de 150 - 180 mg /% pH 7,6. Pitatelnyybulon turnat în eprubete în 3,5 ml, sterilizat prin autoclavare pri1 atm. timp de 20 min. termenul de valabilitate - până la 1 lună. la temperature4sh consum C.Pered al fiecărui tub cu respect pravilaseptiki adăugat 0,5 ml de i0,05 ml ser de bovine (1 picătură) soluție de 2% din telurit de potasiu. Kontroliruyutna mediu steril și depozitate în același mod ca și pentru transportnuyusredu.SREDY semifluide primar seed cercetat MATERIALASreda Clauberg IIK 100 ml de baze agar nutritiv steril (pH 7,6), topit și răcit la 50sh C, glitserinovoysmesi 10 ml, 50 ml "lac" Sânge și 3 ml dintr-o soluție 2% Telurit kaliya.Prinimaya apreciat că mediul nutritiv și razvoditsyaglitserinovoy amestec "lac" sânge de 1,6 ori un anumit priprigotovlenii mediu ar trebui să crească cântărit suhogopitatelnogo agar calcul 1.6 raza.Primer. Eticheta de pe flacon cu agar kommercheskimpitatelnym uscată conține cântărit necesar litru prigotovleniyaodnogo de mediu D. De exemplu, 30 de preparare 1 bază litrapitatelnoy pentru mediu Clauberg II ar trebui să ia navesku48 g (adică 30 g x 1,6 = 48 g) .Pentru amestec glicerină alimentară până la 40 ml de sânge sau defibrinirovannoykrovi amestec se adaugă 20 ml de glicerină chimic chistogosterilnogo (glicerol sterilizat la temperatura 110sh Savanoriu Str timp de 30 min.). pentru prepararea "lac" sterilnoydistillirovannoy de sânge la 34 ml de apă, se adaugă 16 ml de defibrinat krovi.KROVYaNOY TELLURITOVY GELOZĂ (KTA) La 100 ml de baze agar nutritiv steril (pH 7,6), topit și răcit la 50sh C, se adaugă 7 ml de 10 mldefibrinirovannoy sau hemolizat de sânge și 2ml soluție 2% din telurit de potasiu. In schimb, sângele poate fi folosit un amestec suhuyutelluritovuyu (11 ml per 100 ml mediu), în timp ce, la 100 mlKTA nepregătit adăugat 1 ml de soluție 2% de telurit de potasiu, t.k.1 ml de soluție 2% deja conținută în telluritovoysmesi de sânge de 11 ml. Luând în considerare faptul că razvoditsyakrovyu mediu nutritiv de aproximativ 1,1 ori, în pregătirea sleduetuvelichit mediu cântărit agar nutritiv calcul 1.1 raza.Primer uscat. Eticheta de pe flacon cu agar kommercheskimpitatelnym uscată conține cântărit necesar litru prigotovleniyaodnogo de mediu, de exemplu, 30 F. Pentru prepararea bazei 1 litrapitatelnoy pentru CTA trebuie să ia o probă de 33 g (adică 30 g x1,1 = 33 g) .METODIKA PREGĂTIRE KROVYANYHI KROVYANO - preparare TELLURITOVYH SMESEYDlya de medii nutritive bune ispolzovatdefibrikirovannuyu sângele animalelor - vite, cai, porci, oi, iepuri. Sângele a fost colectat în sterilnyesosudy cu perle, folosind un sistem special aseptic montat. În unele cazuri, a fost colectat sânge, sisteme nemontiruya speciale, care fuzionează prima utilizare vnebutyli.Mozhno făină de sânge de sânge uman expirat (citrat și conservanți) prepararea amestecului din acesta spetsialnyekrovyanye. Pentru aceasta este necesar să se îndepărteze sângele chastotstoyavsheysya lichid care conține citrat de sodiu și conservanți. Kostan masă eritrocitară în vas se adaugă soluție sterilnyyfiziologichesky care se poate elimina, de asemenea, eritrocitele posleosedaniya și se adaugă apă distilată dopervonachalnogo obema.Horoshim syremdlyapolucheniya masa sluzhiteritrotsitarnaya amestec de sânge, care pot rămâne când proizvodstvegammaglobulina și alte produse din sânge. Pentru eritrocit massedobavlyayut apă distilată sterilă la rata de 1/3 obemaeritrotsitarnoy massy.Mozhno utiliza, de asemenea, cheaguri de sânge rămase reacții posleserologicheskih (cu un rezultat negativ al reacției), cheaguri sau abortnoy de sânge placentar. cheaguri de Vsterilnye colecta sticle cu mărgele de sticlă și sticlă spartă, și apoi congelate și decongelate, apoi se coagulează ușor razbivayutsyabusami. Această procedură poate fi repetată de 2 - 3 ori. Apoi dobavlyayutsterilnuyu apă distilată la rata de 1/4 din amestecuri sgustkov.V volumului sanguin preparate prin metoda de mai sus, telurit de potasiu a fost adăugat ca un conservant. Pentru fiecare amestec de 10 mlkrovyanoy s-a adăugat 1 ml de soluție 2% din telurit de potasiu. Takuyukrovyano - amestec telluritovuyu poate fi depozitat la 4SH C calcul w2 mesyatsev.Primer. Cu excepția cazului în supernatantul citrata de sânge obemom250 ml 50 a fost eliminat - 60 ml porțiunea lichidă, apoi neobhodimodobavit număr același - 50 - 60 ml sterilnogofiziologicheskogo soluție, se amestecă din nou se lasa sa stea, după care îndepărtați 50 - 60 ml porțiunea lichidă și la 50 - 60 mlsterilnoy apă distilată. Astfel, se va polucheno250 amestec de sânge ml. Este necesar pentru conservarea dobavit25 ml 2% telurit de potasiu (pentru fiecare 10 ml de smesipribavlyayut de sânge 1 ml 2% telurit de potasiu) .În continuare în prepararea sredyna telluritovoy de sânge la fiecare 100 ml de agar nutritiv a fost adăugat 11 amestec krovyanoytelluritovoy ml (10 ml dintr-un amestec de sânge și 1 ml rastvoratellurita 2% potasiu). Nepregătit într-un astfel de mediu s-a adăugat încă 1 ml de soluție soluție Telurit kaliya.Prigotovlenie 2% Telurit media kaliyaDlya telluritovyh utilizat gata soluție kommercheskiy2% Telurit kaliya.Pri absența soluției Telurit disponibil comercial kaliyagotovyat urmează: 100 ml de distilat vodyrastvoryayut 2 g telurit de potasiu cristalin. Pentru sterilizatsiirastvor încălzit într-o baie de apă care fierbe timp de 30 min. și să păstreze pritemperature 4shC. Cristalin de potasiu Telurit hranyatgermeticheski închis bancă întuneric agar stekla.SYVOROTOChNY AGARSyvorotochny utilizat pentru screening-colonii ikultivirovaniya Corynebacterium diphtheriae, pot fi preparate Dragoste Destul de nutrient deasupra osnov.K 100 ml topită și răcită la o temperatură 50sh Cpitatelnogo agar (pH 7,6) sterile 10 ml syvorotkikrupnogo bovine. Mediul este agitat, turnat tuburi vsterilnye la 4 - 5 ml, și ia pus în naklonnompolozhenii pentru fiecare lot înclinat kotorogoproveryaetsya sterilitate. Mai multe tuburi sunt plasate în termostat de noapte. În cazul mediu de germinare este respins toate teșită agar-agar-ser partiya.Probirki stocat la 4SH C w2 nedel.MARTENOVSKY agar VODOYDVOYNOY KONTsENTRATsIIMartenovsky Carne peptonă - 0.5 l, apa din carne - 0,5 l, agar -agar - 15 g acetic - Acid sodiu - 5 g, maltoza - 3 G.15 g agar spălat în timpul protochnoyvodoprovodnoy zi de lucru în apă, drenate și transferată atent într-1 bulion lmartenovskogo (0,5 l vatra peptonă și 0,5 l myasnoyvody). pH ajustat 7.8-8.0 prin alcalinizarea soluție bulona20% de NaOH la o hârtie cu un indicator roșu crezol, care, în această reacție își schimbă culoarea la -malinovy ​​roz galben. Bulionul a fost refluxat timp de 10 min. apoi 0,5% (5 g per 1 L) acetic - Acid de sodiu, 0,3% maltoză (3 g per 1 L), pH-ul este verificat și, dacă este necesar, se ajustează din nou la 7,8 - 8,0, încălzită . vtechenie 15 minute, se lasă să stea într-un loc cald (în vehicul termostatul Koch) de 2 - 3, ore și se filtrează printr-o pânză de bumbac sau un filtru -marlevy. În flacoane sterile (70 - 80 ml) pribolshom volum sau tuburi (10 ml) și sterilizuyutodnokratno abur care curge pentru 30 stomacurile min.Martenovsky peptonSvinye, preferabil asociat cu pereți elastici, cantități mari de mucus si simptomele catarale fara otzhira purificat (stomacuri bila impregnată aruncat), se taie polizor iizmelchayut. Rezultat tocat stomac plasat capacitatea vbutyli de 3 - 5 litri și se încălzește pentru a turna 50sh C vodoyiz bazat pe 1 litru de apă 300 de - 500 g din masa măcinată. Acolo zhedobavlyayut 1% pure chimic de acid clorhidric (greutate specifică 1,19). Masa se agită bine și a pus într-un termostat, fie la 15 -18 oră (sau mai multe) la 37sh C- sau, în cazul în care la otdelnogotermostata 42sh C, 18 ore (sau mai mult). In timpul protsessaperevarivaniyabutyl scuturate la inceput mai des (după 1 până la 1,5 ore), apoi mai puțin frecvent. Peptonă bine digerat butylilezhit stratul inferior mic de proteine ​​fine intunecate balast depunere osadka.Polnotu poate verifica putemdobavleniya la 5 ml de peptonă filtrat 1 - 2 picături de NaOH 10%, turbiditatea nu trebuie enzima poyavlyatsya.Deystvie este oprită prin încălzire într-o baie de apă, mărind treptat temperatura la 80sh C, popokazaniyu stabilit cu un termometru imersată în sticla perevarom.Nagrevanie a continuat timp de 10 min. În acest scop, dispozitivul mozhnoispolzovat Koch sau autoclavă. sticle Tschatelnovzbaltyvayut, închis cu bumbac - tifon cu dop bumazhnymkolpachkom și pus într-un loc uscat, rece pentru temperatură otstaivaniyapri 12sh nu mai mare C. peptonată neranee utilizabil de 7 zile, când strâns suspendat SEDIMENTA chastitsy.Neobhodimo se adaugă 20 ml de cloroform la 1 l peptone dlyakonservirovaniya și închideți flaconul cu un dop de cauciuc. Acest videpepton poate fi depozitat fără sterilizare la concentrație dublă cameră temperature.Myasnaya vodaDlya apă carne de gătit zhelatelnoispolzovat carne proaspătă mediu upitannosti.Obezzhirennoe animal tânăr eliberat de cherezmyasorubku tendon carne a trecut, se toarnă apă într-un 1 litru de apă per 1 kg de tocat iostavlyayut peste noapte la 4SH C, amestecul a fost încălzit la asbestovoysetke dimineață timp de 15 - 20 de minute. din momentul fierberii. otvarfiltruyut Gata, tocate drenate, carnea rezultată este turnată vsterilnye sticla de apă de 250 - 500 ml și sterilizat parom3 fluid zile consecutive la 30 min. Stocat la 4SH indicator C.Bumazhki crezol krasnyy0,1 g crezol roșu se dizolvă în 100 ml de alcool de 95%, la o temperatură de iostavlyayut 37sh C timp de 24 de ore, de multe ori cu agitare. Ziua Patrimoniului este umezită în benzile de soluție filtrovalnoybumagi și se usucă rapid. Bright - lucrări de culoare galbene din veniturile schelochnoysrede în diferite nuanțe krasnogo.SREDY PENTRU STABILIREA TSISTINAZNOY AKTIVNOSTISreda Pisa la OHF agareK 90 ml de topit 1,5% agar OHF (utilizare NU permisibil Hottinger agar), pH 7,6, dobavlyayut2 ml soluție 1% L -tsistina o soluție 0,1N de acid clorhidric (HCl), complet agitat și același volum de 0,1N rastvoraNaOH pentru a neutraliza acidul. soluții acide și alcaline dolzhnybyt titrați reciproc, ispolzovatfiksanaly pot fi produse de promyshlennosti.Sredu chimice sterilizate la 112sh C timp de 30 minute, depozitate timp de 1 lună la 4SH C.Agar cu cistina topit la 90sh C (mediu nu se fierbe timp -. Dlyasohraneniya cistină). La o soluție răcită adăugat mediu 45sh C 1 ML10% acetat de plumb și 9 ml de bovine din ser krupnogorogatogo aseptic și nota poprobirkam.Neobhodimo îmbuteliată că atunci când temperatura 50sh C și mai mare, în prezență de acetat de plumb și ser sredapriobretaet tulbure culoare lăptos. Este dificil de a tine cont de mediu comercial rezultatovreaktsii.Sreda Pisa pe bază de AGVDlya Pisa mediu de gătit pot fi disponibile pe compoziția mediului AGV practica isbalansirovannuyu comerciale utilizate pentru a determina vbakteriologicheskoy chuvstvitelnostimikroorganizmov la antibiotice. O porție cântărită din mediul uscat AGV vkolichestve 2,7 g se introduce în 90 ml apă distilată și dizolvarea completă doee încălzită. Se prepară 5% soluție de carbonat acid natriya.Dlya au fost dizolvate 0,5 g de NaHCC în 10 ml de soluție vody.Zatem distilată se adaugă la 0,1 g de L-cisteină și încălzit până la cistină polnogorastvoreniya. Apoi 2 ml de fierbere, rastvoratsistina alcalin introdus în 90 ml de AGV mediu topit, pH ajustat, și sterilizate la do7,6 112sh C timp de 10 min. Spre 45sh iohlazhdennoy topit la C prin adaugă, succesiv: 10 mlsyvorotki bovine, 1 ml de 10% rastvorauksusnokislogo plumb, proaspăt preparate 1,5 ml de soluție sterilă de tiosulfat de sodiu 10% și se toarnă în acetat de plumb probirkam.Rastvory și tiosulfat de sodiu gotovyatextempore folosind tuburi sterile și apă distilată este sterilizată prin abur care curge, sau într-o baie de apă timp de 30 min.Danny variantsredy Pisa otsutstviiMartenovskogo utilizat în agar. Odnakoneobhodimouchityvat, chtodifferentsialno - proprietăți de diagnostic ale acestui mediu comparisonwith mediu preparate pe agar OHF mai puțin vyrazheny.SREDY DE DETERMINARE ureazei AKTIVNOSTIProbu ureazei pot fi puse în două variante constructive: metoda Sachse Iput inoculare bulionului cu mochevinoy.Prigotovlenie reactivi opredeleniyaureaznoy pentru activitatea metodei reactiv ZakseGotovyat 2 - A și V.Reaktiv A: Uree 2% G96 alcool etilic 2 mlDistillirovannaya 4 mlReaktiv apă B: 0,2% soluție fenolrot 1 mlOdnozameschenny fosfat de potasiu (KH PO) 0,1 4Dv r2 fosfat substituit de potasiu (K HPO) 0,1 gHlorid de sodiu (NaCl) 2 40.5 gDistillirovannaya voda100 mlReaktiv A nu este sterilizat și depozitat la 4SH C.Reaktiv autoclavizat curgător parom.Bulon mochevinoyK cu 100 ml de carne sterilă - sau peptone Hottinger bulion (pH 7,0), se adaugă 1 g de uree și 0,2 ml de 1,6% krezolrot rastvoraindikatora alcool. Turnat în 2 - 3 ml în tuburi sterile sterilizate cu abur care curge pentru 10 min.SREDA DE DETERMINARE AKTIVNOSTIDlya saccarolitic determină activitatea saccarolitic rekomenduetsyaispolzovat medie 1% peptonă vode.K se adaugă 100 ml apă distilată fierbinte 1 g de peptonă, 0,5 g de vedere chimic pur NaCI, și indicator 1 ml Andrede.Ustanavlivayut pH 7,4, fiartă timp de 5 min., se filtrează printr-un filtru de hârtie ilipolotnyany, ajustat la original volum apă goryacheydistillirovannoy. La aceasta s-a adăugat un zaharoză bază izuglevodov, glucoză (1 g), amidon (0,5 g) .Among turnat în eprubete în 2 - 3 ml și tekuchimparom sterilizat timp de 3 zile la 30 min. sau la 0,5 atm. 30 min. Indicatorul Gotovyesredy Andred sunt incolore sau ușor rozovatyyottenok.Indikator AndredePosuda pentru prepararea indicatorului trebuie să fie uscat, chimic pure, cu sol probkoy.K 100 ml de apă distilată, se adaugă 0,5 g de acid fuksinai 16,4 ml de soluție de NaOH 4 procente. Soluția pentru o ostavlyayutpri zi 37sh C, ocazional agitare, două zile ținute nasvete și apoi îndepărtat într-un loc întunecat. proaspăt preparată rastvorimeet paie - galben sau ușor nuanță roz, kotoryyischezaet în timpul depozitării. Când intensiv - okraskerastvora roz timpul indicator de gătit trebuie dobavitesche 1,6 ml de 4 procente soluție NaOH.SREDA DE DETERMINARE nitratreductazei AKTIVNOSTIK 100 ml bulion nutritiv (BCH sau Hottinger bulion) pH 7,3 - 7,5, fără nitriți (verificare Grissaili reactiv Kasatkina) se adaugă 0,1 g de nitrit de nitratakaliya liber (KNO). Verificați din nou pentru nitrit conținut po32 ml și distribuit într-un tub chimic curat, uscat de testare. Mediul a fost sterilizat 15 min.pri 120sh C.Reaktiv GrissaRastvor 1: 0,8% acid sulfanilic în 5N acetic kislote.Rastvor 2: 0,6% alfa-dimetil-5N uksusnoykislote.Pered naftalamin în efectuarea amestecului de reacție volume egale de soluții 1 și 2. fit reactiv pentru utilizare timp de 15 minute, colorație roz incolor, pripoyavlenii -. inutilizabil. Soluțiile 1 și 2 hranyatpri 4SH C pentru 2 mes.Reaktiv KasatkinaRastvor 1: soluție 0,1% în rivanola distilată vode.Rastvor 2: soluție 12% de acid clorhidric (HCI) .Prior efectuarea amestecul de reacție volume egale de soluții 1 și 2. Reactivul GODEN pentru utilizare în termen de 15 min. Soluțiile 1 și 2hranyat la 4SH C pentru 2 mes.RETsEPTY KRASOK1. Lefflera.Distillirovannaya ML1 soluție de apă alcalină metilen albastru 99% de hidroxid de potasiu (KOH) soluție 1 ML10% alcool albastru 30 Metilen mlSmeshat. Păta 1 - 2 min.2. Acetic siniy.Toluidinovy ​​toluidină blue gLedyanaya kislota2 acetic 0,5% alcool etilic ml96 5 100 mlSmeshat mlDistillirovannaya apă. Păta 3 - 5 min.3. Crystal violet fioletovyy.Kristallichesky r5 soluție 0,25% de acid acetic 100 mlSmeshat. Filtrate. Stain 5 - 7 Controlul min.METODY CONTROL NUTRIENTILOR SREDBakteriologicheskomu subiect pervichnogoposevamateriala mediu și mediu pentru determinarea proprietăților toxigene, saccarolitic și biochimice. La fabricarea cuplului sredvazhnym este mediu de control preliminar nasoderzhanie amină baze azota.METOD DETERMINAREA CANTITATIVĂ A Metoda AMINO AZOTAPrintsip se bazează pe blocarea formaldehidă la amine libere pH7,0 și grupări ekvivalentnogokolichestva carboxil titrare alcaline. Start și se termină titrovaniyaopredelyayut potentsiometricheski.Reaktivy: 1. Hidroxid de sodiu (NaOH) 0,1N rastvor.2. Acid clorhidric (HCI) rastvor.4 0,1N. Formalina (soluție de formaldehidă 40%). Înainte de a kazhdymopredeleniem necesare pentru a aduce pH-ul la formalina 7,0.Hod opredeleniyaDlya analiza o cantitate dată de probă lichidă. Dlyazhidkih hidrolizatele cu un grad scăzut de digestie (0,1 - 0,2% azot aminic) - 3 ml- cu un grad mediu de divizare (0,3 -0.6% oxid de amină) - 1 ml- cu un grad ridicat de divizare (0,7 -1.3% oxid de amină) - 0,5 ml- lichid medii de cultură (0,08% -0.04 azot aminic) - 3 ml- extracte lichide (0,02 -0.04% oxid de amină) - 10 ml.V pahar de 50 ml din proba de testare și să facă volumul dovodyatobschy de apă distilată până la 20 ml. Elektrodypotentsiometra cufundat în soluția de testat și pHrastvora ajustat la 7,0 cu NaOH 0,1N 0,1N rastvoraHCl sau soluție. Apoi 2 ml de formol neutru și se agită fără a scoate electrozii, conținutul probei este titrat folosind 0,1Nrastvora NaOH până la pH 9,1. În titrare trebuie ispolzovatmikrobyuretku 5 ml.Soderzhanie amino azot din probă în% (X) se calculează cu formula: A x K x 1.4 x 100X = ----------------- , gdeB x 1000A - numărul de soluție 0,1N NaOH în ml, care a mers la proba titrovanieissleduemoy K - corecția pentru titrului 0,1N NaOH-1,4 soluție - cantitatea de azot aminic în mg care este echivalent cu 1 ml de NaOH 100 0,1Nrastvora - factor de conversie în interesul-B - cantitatea de probă lichidă în mililitri prelevate pentru analiză 1000 - coeficient de conversie mg laboratoare practice g.METOD BACTERIOLOGICĂ CONTROL NUTRIENTILOR SREDV la zhdaya medii de cultură lot, mai ales atunci când se utilizează baze noi (ililaboratornogo fabricarea industrială) și controlul noilor ingrediente podlezhitbakteriologicheskomu datorită posibilei nestandartnosti.1 lor. Controlul calității medii pentru însămânțare issleduemogomateriala primar stabilit prin determinarea: a) celule de germinare Corynebacterium diphtheria-b) timp la formarea de colonii) ingibiruyuscheyaktivnostiv respect soputstvuyuscheymikroflory.S utilizate în acest scop un control tulpină toxigenic ilisvezhevydelennye cultură toxigenic Corynebacterium diphtheriae stipichnymi cultural - morfologice proprietăți shtammzolotistogo aureus (музейный или свежевыделенный).Суточные культуры коринебактерий дифтерии и стафилококка,вы ращенные на сывороточном агаре, смывают физиологическимраствором. Мутность полученной суспензии должна соответствовать10 ед. оптического стандарта мутности ГИСК им. LA Тарасевича(условно 1 млрд. бактериальных клеток в 1 мл взвеси). Из исходныхвзвесей культур коринебактерий дифтерии и стафилококка готовятпоследовательные разведения вфизиологическомрастворе(см. схему).СХЕМАПРИГОТОВЛЕНИЯ РАЗВЕДЕНИЙ КУЛЬТУРЫ КОРИНЕБАКТЕРИЙДИФТЕРИИ И СТАФИЛОКОККА+-----+-----------+---------------------------+------------------+| N | Кол-во | Объем вносимой | Условное кол-во ||про- | физиол. | суспензии, мл | микр. клеток ||бирки| р-ра, мл | | в 1 мл взвеси |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 8 || 1 |1,0| 1,0 из исходной взвеси| 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 7 || 2 |4,5| 0,5 из 1-й пробирки | 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 6 || 3 |4,5| 0,5 из 2-й пробирки | 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 5 || 4 |4,5| 0,5 из 3-й пробирки | 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 4 || 5 |4,5| 0,5 из 4-й пробирки | 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 3 || 6 |4,5| 0.5 
Distribuiți pe rețelele sociale: 

 
 
înrudit
 
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.
Drept medical: drept, documente, responsabilități, reguli, acte.